| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-29页 |
| 1.1 手性化合物 | 第13-14页 |
| 1.2 手性胺和手性氨醇类化合物 | 第14-16页 |
| 1.3 手性胺和手性氨醇类化合物的合成 | 第16-19页 |
| 1.3.1 化学合成 | 第17页 |
| 1.3.2 生物合成 | 第17-19页 |
| 1.4 转氨酶 | 第19-24页 |
| 1.4.1 转氨酶的分类 | 第20页 |
| 1.4.2 ω-转氨酶 | 第20-21页 |
| 1.4.3 ω-转氨酶在合成手性胺和手性氨醇类化合物的应用 | 第21-24页 |
| 1.5 ω-转氨酶筛选方法的介绍 | 第24-27页 |
| 1.6 本课题研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 转氨酶筛选方法的建立 | 第29-39页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.1 菌株来源 | 第29-30页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第30页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 显色反应条件探究 | 第30-31页 |
| 2.3.2 筛选方法灵敏度探究 | 第31-32页 |
| 2.3.3 转氨酶的筛选 | 第32页 |
| 2.3.4 分析方法 | 第32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.4.1 显色条件 | 第32-35页 |
| 2.4.2 筛选方法的灵敏度 | 第35-36页 |
| 2.4.3 全细胞空白对照 | 第36页 |
| 2.4.4 转氨酶的筛选 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-39页 |
| 第三章 ω-转氨酶目的基因的克隆与重组表达 | 第39-55页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第39-41页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第39页 |
| 3.2.2 试剂盒 | 第39页 |
| 3.2.3 试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第40页 |
| 3.2.5 培养基及其他试剂配制 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.3.1 搜索及比对目的基因 | 第41页 |
| 3.3.2 设计引物及目的基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.3.3 ω-转氨酶表达载体的构建及目的蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 3.3.4 目的蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-52页 |
| 3.4.1 ω-转氨酶基因的挖掘 | 第44-47页 |
| 3.4.2 重组载体的构建 | 第47-50页 |
| 3.4.3 目的蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 3.4.4 目的蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-55页 |
| 第四章 ω-转氨酶酶学性质表征及其底物特异性研究 | 第55-69页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 菌株及培养基 | 第55页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第55-56页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-59页 |
| 4.3.1 酶活测定方法 | 第56-57页 |
| 4.3.2 不同pH对酶活性的影响 | 第57页 |
| 4.3.3 不同温度对酶活性的影响 | 第57页 |
| 4.3.4 ω-转氨酶温度稳定性测定 | 第57页 |
| 4.3.5 ω-转氨酶动力学特征测定 | 第57页 |
| 4.3.6 ω-转氨酶底物特异性研究 | 第57-59页 |
| 4.3.7 制备S构型苯甘氨醇 | 第59页 |
| 4.3.8 分析方法 | 第59页 |
| 4.4 结果与分析 | 第59-66页 |
| 4.4.1 不同pH对ω-转氨酶酶活的影响 | 第59-61页 |
| 4.4.2 不同温度对ω-转氨酶酶活的影响 | 第61-62页 |
| 4.4.3 ω-转氨酶温度稳定性 | 第62-63页 |
| 4.4.4 ω-转氨酶底物动力学性质 | 第63-64页 |
| 4.4.5 ω-转氨酶特异性催化反应合成手性胺和邻氨基醇 | 第64-66页 |
| 4.4.6 转氨酶PpspuC动力学拆分外消旋苯甘氨醇制备S构型苯甘氨醇 | 第66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-69页 |
| 第五章 主要结论与展望 | 第69-71页 |
| 5.1 主要结论 | 第69-70页 |
| 5.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及申请的专利 | 第85页 |
