| 中文摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 第一章 肠道病毒71型 | 第11-23页 |
| 1.1 病原学 | 第11-20页 |
| 1.1.1 人肠道病毒分型 | 第11页 |
| 1.1.2 理化性质 | 第11-12页 |
| 1.1.3 基因组结构 | 第12页 |
| 1.1.4 生命周期概述 | 第12-13页 |
| 1.1.5 病毒基因表达的调控 | 第13-20页 |
| 1.2 临床流行病学及分子流行病学 | 第20-21页 |
| 1.2.1 临床流行病学 | 第20页 |
| 1.2.2 分子流行病学 | 第20-21页 |
| 1.3 防控前景 | 第21-23页 |
| 第二章 早期生长反应因子1(EGR1) | 第23-37页 |
| 2.1 EGR家族 | 第23-24页 |
| 2.2 EGR1基因及蛋白的特征 | 第24-34页 |
| 2.2.1 EGR1基因的结构 | 第24-25页 |
| 2.2.2 EGR1蛋白的特性 | 第25-28页 |
| 2.2.3 EGR1的表达调控 | 第28-33页 |
| 2.2.4 EGR1 mRNA及蛋白表达 | 第33-34页 |
| 2.3 EGR1的功能 | 第34-35页 |
| 2.4 病毒与EGR1的关系 | 第35页 |
| 2.5 EGR1与EV71的关系 | 第35-37页 |
| 第三章 EV71感染调控EGR1表达 | 第37-43页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第37-38页 |
| 3.2.1 细胞株 | 第37页 |
| 3.2.2 病毒 | 第37页 |
| 3.2.3 哺乳乳动物细胞培养基 | 第37页 |
| 3.2.4 抗体 | 第37页 |
| 3.2.5 相关仪器 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-40页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第38页 |
| 3.3.2 细胞的冻存与复苏 | 第38页 |
| 3.3.3 病毒的扩增 | 第38页 |
| 3.3.4 病毒滴度的测定 | 第38-39页 |
| 3.3.5 EV71感染细胞 | 第39页 |
| 3.3.6 病毒的灭活 | 第39页 |
| 3.3.7 蛋白质免疫印迹法(Western blot) | 第39-40页 |
| 3.4 实验结果 | 第40-42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 EV71感染早期通过激活PI3K/AKT、PKA及PKC-E信号通路诱导EGR1表达 | 第43-47页 |
| 4.1 前言 | 第43页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第43页 |
| 4.2.1 通路抑制剂 | 第43页 |
| 4.2.2 干扰RNA质粒与菌种 | 第43页 |
| 4.2.3 抗体 | 第43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-44页 |
| 4.3.1 转染 | 第43-44页 |
| 4.3.2 细胞中加入抑制剂 | 第44页 |
| 4.4 实验结果 | 第44-46页 |
| 4.4.1 EV71感染SK-N-SH细胞中EGR1的激活涉及到PKA、PKC-ε及PI3K/Akt通路 | 第44-46页 |
| 4.4.2 EV71感染早期使PKA、PKC-ε及Akt发生磷酸化 | 第46页 |
| 4.5 讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 EV71感染晚期EGR1的降解源自于凋亡通路的激活 | 第47-57页 |
| 5.1 前言 | 第47页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第47页 |
| 5.2.1 质粒 | 第47页 |
| 5.2.2 抗体及试剂 | 第47页 |
| 5.2.3 相关仪器 | 第47页 |
| 5.3 实验方法 | 第47-51页 |
| 5.3.1 质粒构建 | 第47-49页 |
| 5.3.2 质粒提取 | 第49-50页 |
| 5.3.3 RNA的提取 | 第50页 |
| 5.3.4 逆转录 | 第50页 |
| 5.3.5 半定量PCR | 第50-51页 |
| 5.3.6 流式细胞术 | 第51页 |
| 5.4 实验结果 | 第51-56页 |
| 5.4.1 EV71 2A及3C蛋白酶可以使EGR1降解 | 第51-54页 |
| 5.4.2 EGR1的切割降解是由Caspase引起的非特异性降解 | 第54-56页 |
| 5.5 讨论 | 第56-57页 |
| 第六章 EGR1蛋白与EV71 5'UTR相互作用 | 第57-70页 |
| 6.1 前言 | 第57页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第57页 |
| 6.2.1 抗体与试剂 | 第57页 |
| 6.2.2 相关仪器 | 第57页 |
| 6.3 实验方法 | 第57-60页 |
| 6.3.1 共沉淀及RT-PCR | 第57-58页 |
| 6.3.2 生物素标记的RNA与蛋白pull-down实验 | 第58-59页 |
| 6.3.3 构建5'UTR截短质粒及EGR1截短质粒 | 第59-60页 |
| 6.3.4 免疫荧光 | 第60页 |
| 6.4 实验结果 | 第60-68页 |
| 6.4.1 EGR1能够直接结合在EV71 5'UTR上 | 第60-62页 |
| 6.4.2 EGR1结合在EV71 5'UTR的第1、4号茎环上 | 第62-64页 |
| 6.4.3 EGR1利用前两个C2H2结构域结合EV71 5’UTR | 第64-66页 |
| 6.4.4 EGR1能和EV71病毒RNA定位在一起 | 第66-68页 |
| 6.5 讨论 | 第68-70页 |
| 第七章 EGR1促进EV71病毒的复制 | 第70-76页 |
| 7.1 前言 | 第70页 |
| 7.2 实验材料与仪器 | 第70页 |
| 7.2.1 质粒 | 第70页 |
| 7.2.2 相关仪器 | 第70页 |
| 7.3 实验方法 | 第70-72页 |
| 7.3.1 EGR1干扰质粒构建 | 第70-71页 |
| 7.3.2 荧光素酶检测 | 第71页 |
| 7.3.3 EV71病毒正负链cDNA转录及Real-Time PCR检测 | 第71页 |
| 7.3.4 TCID_(50)法测量细胞上清中病毒滴度 | 第71-72页 |
| 7.4 实验结果 | 第72-75页 |
| 7.4.1 EGR1上调EV71 IRES活性 | 第72-73页 |
| 7.4.2 EGR1促进EV71 RNA及蛋白的合成 | 第73-74页 |
| 7.4.3 EGR1促进细胞上清中EV71病毒滴度水平 | 第74-75页 |
| 7.5 讨论 | 第75-76页 |
| 第八章 EGR1可不依赖MIR-141途径促进EV71病毒的复制 | 第76-83页 |
| 8.1 前言 | 第76页 |
| 8.2 实验材料与仪器 | 第76页 |
| 8.2.1 抗体及试剂 | 第76页 |
| 8.2.2 菌种 | 第76页 |
| 8.2.3 仪器 | 第76页 |
| 8.3 实验方法 | 第76-78页 |
| 8.3.1 miR-141检测 | 第76-77页 |
| 8.3.2 miR-141 Inhibitor转染 | 第77页 |
| 8.3.3 蛋白表达纯化 | 第77页 |
| 8.3.4 EMSA实验 | 第77-78页 |
| 8.4 实验结果 | 第78-82页 |
| 8.4.1 EGR1 C2H21-3截短蛋白能够促进EV71复制 | 第78-80页 |
| 8.4.2 EGR1在miR-141抑制剂存在的情况下可以促进EV71复制 | 第80-82页 |
| 8.5 讨论 | 第82-83页 |
| 第九章 研究意义和创新 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-102页 |
| 博士在读期间发表与待发表论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
