| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 海藻糖及海藻糖合酶 | 第17-21页 |
| 1.1.1 海藻糖功能简介 | 第17页 |
| 1.1.2 微生物合成海藻糖相关途径 | 第17-19页 |
| 1.1.3 海藻糖生产方法及海藻糖合酶研究现状 | 第19-21页 |
| 1.2 毕赤酵母表达体系 | 第21-23页 |
| 1.2.1 毕赤酵母表达体系简介 | 第21页 |
| 1.2.2 毕赤酵母表达体系常用菌株 | 第21页 |
| 1.2.3 毕赤酵母表达体系常用质粒 | 第21-22页 |
| 1.2.4 毕赤酵母表达系统启动子介绍 | 第22-23页 |
| 1.2.5 毕赤酵母表达体系的优劣势 | 第23页 |
| 1.3 本课题研究的内容与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 重组海藻糖合酶毕赤酵母菌株构建及其酶学性质检测 | 第25-45页 |
| 2.1 毕赤酵母海藻糖合酶重组质粒的构建 | 第25-32页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.1.3 实验结果与讨论 | 第29-32页 |
| 2.2 海藻糖合酶重组质粒的转化构建重组毕赤酵母菌株 | 第32-38页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 2.2.3 实验结果与讨论 | 第34-38页 |
| 2.3 海藻糖合酶酶学性质的测定 | 第38-43页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第38页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 2.3.3 实验结果与讨论 | 第39-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-45页 |
| 第三章 多拷贝重组毕赤酵母的构建、筛选及运用ddPCR确定拷贝数 | 第45-57页 |
| 3.1 利用2A体系构建双拷贝基因重组毕赤酵母菌株 | 第45-49页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 3.1.3 实验结果与讨论 | 第47-49页 |
| 3.2 多拷贝重组海藻糖合酶毕赤酵母菌株的筛选及利用ddPCR确定绝对拷贝数 | 第49-56页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 3.2.3 实验结果与讨论 | 第52-56页 |
| 3.3 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 P_(GAP)、改造P_(ADX1)及其用于海藻糖合酶的表达 | 第57-75页 |
| 4.1 P_(GAP)替换P_(AOX1)载体pGAP3.5k的构建 | 第57-60页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第57页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 4.1.3 实验结果与讨论 | 第59-60页 |
| 4.2 PGAP用于嗜热细菌海藻糖合酶的表达及其酶学性质检测 | 第60-63页 |
| 4.2.1 实验材料及方法 | 第60页 |
| 4.2.2 实验结果讨论 | 第60-63页 |
| 4.3 含突变P_(AOX1)重组载体的构建 | 第63-67页 |
| 4.3.1 实验材料 | 第64页 |
| 4.3.2 实验方法 | 第64-65页 |
| 4.3.3 实验结果及讨论 | 第65-67页 |
| 4.4 改造P_(AOX1)用于海藻糖合酶的重组表达 | 第67-72页 |
| 4.4.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.4.2 实验方法 | 第68页 |
| 4.4.3 实验结果及讨论 | 第68-72页 |
| 4.5 本章小结 | 第72-75页 |
| 第五章 过表达中心代谢途径基因提高海藻糖合酶表达量 | 第75-85页 |
| 5.1 4个中心代谢途径基因的克隆和重组质粒及共表达菌株构建 | 第76-79页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第76页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第76-77页 |
| 5.1.3 结果与讨论 | 第77-79页 |
| 5.2 共表达重组工程菌海藻糖合酶表达量的测定 | 第79-83页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第79页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第79-80页 |
| 5.2.3 结果与讨论 | 第80-83页 |
| 5.3 本章小结 | 第83-85页 |
| 第六章 结论与展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 附录一 | 第93-97页 |
| 附录二 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 研究成果及发表论文 | 第101-103页 |
| 导师与作者简介 | 第103-104页 |
| 附件 | 第104-105页 |
