| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| 1.1 反式4羟脯氨酸的概述 | 第7-8页 |
| 1.1.1 反式4羟脯氨酸的性质 | 第7页 |
| 1.1.2 反式4羟脯氨酸的应用 | 第7-8页 |
| 1.1.3 反式4羟脯氨酸的生产方法 | 第8页 |
| 1.2 微生物发酵法生产反式4羟脯氨酸的研究进展 | 第8-9页 |
| 1.3 促进微生物发酵生产反式4羟脯氨酸的研究策略 | 第9-11页 |
| 1.3.1 谷氨酸激酶的研究 | 第10页 |
| 1.3.2 N-乙酰谷氨酸激酶的研究 | 第10-11页 |
| 1.3.3 透明颤菌血红蛋白共表达的积极作用 | 第11页 |
| 1.4 本课题研究意义和研究内容 | 第11-13页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第11页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第11-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-22页 |
| 2.1 实验材料 | 第13-16页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及引物 | 第13-14页 |
| 2.1.2 试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.3 培养基 | 第15页 |
| 2.1.4 仪器 | 第15-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-19页 |
| 2.2.1 溶液的配制 | 第16页 |
| 2.2.2 重组菌株的构建 | 第16-18页 |
| 2.2.3 发酵培养基的优化 | 第18-19页 |
| 2.2.4 发酵条件优化 | 第19页 |
| 2.2.5 补料发酵 | 第19页 |
| 2.3 分析方法 | 第19-22页 |
| 2.3.1 生长曲线的测定 | 第19页 |
| 2.3.2 发酵曲线测定 | 第19-20页 |
| 2.3.3 反式4羟脯氨酸浓度的测定及标准曲线的绘制 | 第20页 |
| 2.3.4 L-脯氨酸浓度的测定及标准曲线的绘制 | 第20-21页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE分析 | 第21页 |
| 2.3.6 全细胞酶活的测定 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-45页 |
| 3.1 基因proB2A与hyp共表达重组菌株的构建 | 第22-28页 |
| 3.1.1 基因proB2A与hyp共表达载体的构建 | 第22-27页 |
| 3.1.2 重组表达载体以及宿主菌的筛选 | 第27-28页 |
| 3.2 精氨酸缺陷型重组大肠杆菌的构建 | 第28-31页 |
| 3.2.1 argB敲除菌株的验证 | 第29-30页 |
| 3.2.2 argB基因敲除菌株的初步发酵 | 第30页 |
| 3.2.3 L-精氨酸添加对精氨酸缺陷型菌株的影响 | 第30-31页 |
| 3.3 重组大肠杆菌JM109ΔargB/pUC19-BH的摇瓶发酵 | 第31-41页 |
| 3.3.1 重组大肠杆菌生长特征 | 第31-32页 |
| 3.3.2 重组大肠杆菌发酵培养基成分优化 | 第32-39页 |
| 3.3.3 重组大肠杆菌发酵条件优化 | 第39-41页 |
| 3.3.4 小结 | 第41页 |
| 3.4 重组大肠杆菌JM109/pUC19-BHV的构建及高密度发酵 | 第41-45页 |
| 3.4.1 透明颤菌血红蛋白VHB基因的引入 | 第41-42页 |
| 3.4.2 重组大肠杆菌的摇瓶发酵 | 第42-43页 |
| 3.4.3 重组大肠杆菌的补料发酵 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-47页 |
| 主要结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
