摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
1 绪论 | 第10-23页 |
1.1 水稻及其面临的生物胁迫与非生物胁迫 | 第10-11页 |
1.2 干旱胁迫对植物的影响 | 第11-12页 |
1.3 植物对干旱胁迫的调节 | 第12-16页 |
1.3.1 气孔调节 | 第12页 |
1.3.2 渗透物质以及参与渗透调节的基因 | 第12-14页 |
1.3.3 活性氧的清除 | 第14页 |
1.3.4 特殊蛋白的保护作用 | 第14-15页 |
1.3.5 植物激素的调节 | 第15-16页 |
1.4 甘油3磷酸脱氢酶基因的研究进展 | 第16-21页 |
1.4.1 甘油3磷酸脱氢酶的分类 | 第16页 |
1.4.2 甘油3磷酸脱氢酶的研究进展 | 第16-21页 |
1.4.2.1 甘油3磷酸脱氢酶在油脂生物合成过程中的作用 | 第16-18页 |
1.4.2.2 甘油3磷酸脱氢酶(GPDH)在生物胁迫中的作用 | 第18-20页 |
1.4.2.3 甘油3磷酸脱氢酶(GPDH)在非生物胁迫中的作用 | 第20-21页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
1.6 本研究的技术路线 | 第22-23页 |
2 材料和方法 | 第23-39页 |
2.1 材料 | 第23-24页 |
2.1.1 水稻材料 | 第23页 |
2.1.2 菌株和载体 | 第23页 |
2.1.3 实验耗材和仪器 | 第23页 |
2.1.4 实验中主要溶液的配制 | 第23-24页 |
2.2 方法 | 第24-39页 |
2.2.1 GPDH蛋白的生物信息学分析 | 第24-25页 |
2.2.2 水稻品种日本晴总RNA提取(TRNzol-A+法) | 第25-26页 |
2.2.2.1 水稻品种日本晴总RNA的提取 | 第25页 |
2.2.2.2 总RNA质量的检测方法 | 第25-26页 |
2.2.3 反转录合成第一条链cDNA | 第26页 |
2.2.4 引物的设计 | 第26-27页 |
2.2.5 荧光定量PCR(qPCR) | 第27页 |
2.2.6 OsGPDH1基因的表达模式分析 | 第27-29页 |
2.2.6.1 OsGPDH1的组织表达特性分析 | 第27页 |
2.2.6.2 OsGPDH1在不同胁迫及激素处理下的表达模式 | 第27-28页 |
2.2.6.3 OsGPDH1在水陆稻的表达情况 | 第28-29页 |
2.2.7 OsGPDH1基因的克隆 | 第29页 |
2.2.8 凝胶回收OsGPDH1基因片段与TA克隆 | 第29-30页 |
2.2.8.1 凝胶回收目标片段 | 第29-30页 |
2.2.8.2 PCR平末端产物加A | 第30页 |
2.2.8.3 T-A克隆 | 第30页 |
2.2.9 质粒的抽提(TIANprep Mini Plasmid Kit) | 第30-31页 |
2.2.10 OsGPDH1过表达载体的构建 | 第31-32页 |
2.2.11 农杆菌转化 | 第32-33页 |
2.2.12 农杆菌介导的水稻遗传转化[153] | 第33-34页 |
2.2.13 转基因植株的阳性检测、拷贝数的检测、表达量的检测 | 第34-39页 |
2.2.13.1 CTAB小样法抽提DNA | 第34页 |
2.2.13.2 转基因植株的阳性检测 | 第34-35页 |
2.2.13.3 转基因植株的拷贝数检测和表达量的检测 | 第35-38页 |
2.2.13.4 转基因植株的表达量的检测 | 第38-39页 |
2.2.14 转基因植株苗期抗逆试验 | 第39页 |
2.2.14.1 转基因植株在高盐胁迫下的萌发试验 | 第39页 |
2.2.14.2 转基因植株苗期PEG6000模拟干旱胁迫试验 | 第39页 |
3 结果 | 第39-48页 |
3.1 GPDH蛋白的生物信息学分析 | 第39-40页 |
3.2 OsGPDH1基因的表达模式分析 | 第40-43页 |
3.2.1 OsGPDH1基因的组织表达特性分析 | 第40-41页 |
3.2.2 OsGPDH1基因在不同胁迫及激素处理下的表达模式 | 第41-43页 |
3.2.3 OsGPDH1基因在不同水陆稻或籼粳稻中的表达分析 | 第43页 |
3.3 OsGPDH1基因的克隆、载体的构建和转基因植株的获得 | 第43-46页 |
3.3.1 OsGPDH1基因的克隆 | 第43-44页 |
3.3.2 超表达载体的构建 | 第44-45页 |
3.3.3 转基因植株的阳性检测 | 第45-46页 |
3.4 转基因植株的拷贝数和表达量的检测 | 第46-47页 |
3.5 转基因植株在非生物胁迫下的表型鉴定试验 | 第47-48页 |
3.5.1 转基因材料在盐胁迫下的萌发率 | 第47页 |
3.5.2 转基因植株苗期PEG模拟干旱胁迫试验 | 第47-48页 |
4 讨论 | 第48-51页 |
4.1 挖掘和鉴定抗旱候选基因的必要性 | 第48-49页 |
4.2 OsGPDH1基因功能的讨论 | 第49-50页 |
4.3 下一步的工作展望 | 第50-51页 |
5 结论 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-61页 |
附录 | 第61-66页 |
致谢 | 第66页 |