| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩写词表 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-18页 |
| 1 miRNA调控哺乳动物生殖过程的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1 下丘脑-垂体-性腺轴在哺乳动物繁殖过程中的调控作用 | 第12页 |
| 1.2 哺乳动物繁殖相关miRNA研究进展 | 第12-15页 |
| 2 试验相材料和技术方法介绍 | 第15-18页 |
| 2.1 实验猪品种介绍 | 第15页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR | 第15-16页 |
| 2.3 双荧光素酶报告系统及在miRNA研究上的应用 | 第16页 |
| 2.4 凝胶迁移实验 | 第16-18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-31页 |
| 1.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 1.2 主要仪器和试验试剂 | 第20-21页 |
| 1.2.1 主要仪器 | 第20页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.2.3 常用试剂的配制 | 第21页 |
| 1.3 试验方法 | 第21-31页 |
| 1.3.1 miRNA和mRNA引物设计与合成 | 第21-22页 |
| 1.3.2 总RNA提取及质量检测 | 第22-23页 |
| 1.3.3 miRNA的反转录及定量 | 第23-24页 |
| 1.3.4 mRNA的反转录及定量 | 第24-25页 |
| 1.3.5 基因表达数据分析 | 第25-26页 |
| 1.3.6 与靶基因结合位点的预测 | 第26页 |
| 1.3.7 双荧光素酶所用载体及目的片段引物设计 | 第26-28页 |
| 1.3.8 EMSA的DNA探针设计 | 第28页 |
| 1.3.9 双荧光素酶报告基因实验 | 第28-30页 |
| 1.3.10 EMSA实验 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-43页 |
| 2.1 总RNA的抽提与检测 | 第31-32页 |
| 2.2 荧光实时定量qPCR标准曲线和熔解曲线的分析 | 第32-33页 |
| 2.3 miR-429、ZEB1、LHβ、miR1433p和miR1453p在大约克夏猪和皖南黑猪母猪生殖轴组织中的表达规律 | 第33-35页 |
| 2.4 miR-429、ZEB1和LHβ在高、低产仔数母猪生殖轴组织中的表达差异 | 第35-38页 |
| 2.5 miR1433p、miR1453p在高、低产仔数母猪生殖轴组织中的表达差异 | 第38-40页 |
| 2.6 miR-429、转录因子ZEB1与靶基因结合位点的预测 | 第40页 |
| 2.6.1 miR-429与ZEB1结合位点 | 第40页 |
| 2.6.2 转录因子ZEB1和LHβ结合位点 | 第40页 |
| 2.7 双荧光素酶实验 | 第40-42页 |
| 2.7.1 重组质粒的测序结果与分析 | 第40-41页 |
| 2.7.2 转染条件的优化 | 第41页 |
| 2.7.3 双荧光素酶报告基因活性的检测 | 第41-42页 |
| 2.8 EMSA实验 | 第42-43页 |
| 2.8.1 BCA检测蛋白的浓度 | 第42-43页 |
| 2.8.2 EMSA实验的鉴定结果 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-47页 |
| 3.1 不同品种间miRNA表达的差异 | 第43-44页 |
| 3.2 miR-429对母猪产仔数的影响 | 第44页 |
| 3.3 miR-429调控母猪产仔数的分子机制 | 第44-45页 |
| 3.4 miR1433p对母猪产仔数的影响 | 第45-46页 |
| 3.5 miR1453p对母猪产仔数的影响 | 第46-47页 |
| 4 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
