摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-11页 |
第一章 综述 | 第11-21页 |
第一节 DNA甲基化 | 第11-13页 |
第二节 原始生殖细胞的形成和迁移 | 第13-16页 |
第三节 原始生殖细胞与DNA甲基化 | 第16-18页 |
第四节 生殖细胞特异性基因的表达与DNA甲基化修饰 | 第18页 |
第五节 转录因子NRF1和生殖细胞特异性基因 | 第18-21页 |
第二章 实验材料和方法 | 第21-34页 |
第一节 实验材料 | 第21-25页 |
1. 细胞株 | 第21页 |
2. 细胞培养 | 第21-22页 |
3. 质粒和引物序列 | 第22页 |
4. 实验试剂 | 第22-23页 |
5. 实验仪器 | 第23-25页 |
第二节 实验方法 | 第25-34页 |
1. 感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
2. 质粒的构建 | 第26-27页 |
3. RNA的提取及逆转录 | 第27-28页 |
4. 聚合酶链式反应(PCR)技术 | 第28-29页 |
5. 质粒的小量抽提技术 | 第29-30页 |
6. Luciferase assay技术 | 第30-32页 |
7. SSEA1染色 | 第32-33页 |
8. AP染色 | 第33-34页 |
第三章 实验结果与分析 | 第34-51页 |
第一部分 促进胚胎干细胞向原始生殖细胞分化的基因的筛选 | 第34-41页 |
第一节 候选基因在各组织和不同天EB中的表达情况 | 第34-35页 |
第二节 在胚胎干细胞中稳定细胞系的建立 | 第35-37页 |
第三节 EB中SSEA1阳性细胞比例和EB打散后AP克隆形成的能力 | 第37-41页 |
第二部分 生殖细胞特异性基因的表达受到DNA甲基化和转录因子的双调控 | 第41-51页 |
第一节 转录因子NRF1的表达情况 | 第42-45页 |
第二节 生殖细胞特异性基因的筛选及其启动子的分析 | 第45-46页 |
第三节 NRF1对生殖细胞特异性基因表达的调节作用 | 第46-48页 |
第四节 转录因子OCT-1的表达情况及其对生殖细胞特异性基因的调节 | 第48-51页 |
第四章 总结与讨论 | 第51-53页 |
附录 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-58页 |
致谢 | 第58页 |