| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 梨小食心虫的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 梨小食心虫的发生规律研究 | 第13-15页 |
| 1.1.2 环境因素对梨小食心虫生长发育的影响 | 第15-16页 |
| 1.1.3 寄主植物对梨小食心虫生长发育的影响 | 第16-17页 |
| 1.1.4 梨小食心虫饲养技术及信息素的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.1.5 梨小食心虫的防治研究 | 第18页 |
| 1.2 昆虫中肠蛋白酶的研究进展 | 第18-23页 |
| 1.2.1 昆虫中肠丝氨酸族蛋白酶的功能研究 | 第18-19页 |
| 1.2.2 昆虫中肠胰蛋白酶的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.3 昆虫蛋白酶酶活性与寄主植物的关系 | 第21-22页 |
| 1.2.4 昆虫蛋白酶与害虫防治的关系 | 第22-23页 |
| 1.3 研究内容及技术路线 | 第23页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 寄主对梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶活性的影响 | 第26-27页 |
| 2.2.1 供试虫源及寄主 | 第26页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 中肠酶液的制备 | 第26页 |
| 2.2.2.2 胰蛋白酶活性的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 胰蛋白酶的最适pH值测定 | 第27页 |
| 2.2.2.4 不同寄主饲喂的梨小食心虫幼虫中肠蛋白酶活性测定 | 第27页 |
| 2.3 寄主对梨小食心虫生长发育的影响 | 第27-28页 |
| 2.3.1 供试虫源和寄主种类 | 第27页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第27-28页 |
| 2.3.3 实验数据处理 | 第28页 |
| 2.3.4 梨小食心虫适宜寄主植物等级评定 | 第28页 |
| 2.4 梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶基因克隆及全长获得 | 第28-33页 |
| 2.4.1 幼虫中肠组织收集 | 第28-29页 |
| 2.4.2 梨小食心虫幼虫中肠总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.4.3 目的cDNA的合成 | 第29-30页 |
| 2.4.4 简并性引物设计 | 第30页 |
| 2.4.5 目的cDNA片段扩增 | 第30-31页 |
| 2.4.6 PCR产物回收和纯化 | 第31页 |
| 2.4.7 连接反应 | 第31页 |
| 2.4.8 质粒载体转化 | 第31-32页 |
| 2.4.9 阳性克隆鉴定 | 第32页 |
| 2.4.10 胰蛋白酶基因全长扩增 | 第32-33页 |
| 2.4.11 序列分析 | 第33页 |
| 2.5 取食不同寄主的梨小食心虫幼虫胰蛋白酶基因表达 | 第33-37页 |
| 2.5.1 梨小食心虫幼虫中肠组织的收集 | 第33页 |
| 2.5.2 梨小食心虫幼虫中肠总RNA的提取 | 第33页 |
| 2.5.3 cDNA第一链的合成 | 第33-34页 |
| 2.5.4 实时荧光定量PCR检测 | 第34-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-55页 |
| 3.1 梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶最适pH测定结果 | 第37-38页 |
| 3.2 寄主植物对不同龄期梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶活性的影响 | 第38-41页 |
| 3.3 寄主植物对梨小食心虫生长发育的影响 | 第41-44页 |
| 3.4 梨小食心虫胰蛋白酶基因克隆 | 第44-50页 |
| 3.4.1 梨小食心虫幼虫中肠总RNA的提取 | 第44-45页 |
| 3.4.2 梨小食心虫胰蛋白酶基因目的cDNA片段的克隆 | 第45-46页 |
| 3.4.3 GMtrypsin-1 全长cDNA | 第46-47页 |
| 3.4.4 GMtrypsin-2 全长cDNA | 第47-48页 |
| 3.4.5 梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶基因全长验证 | 第48页 |
| 3.4.6 系统进化分析 | 第48-50页 |
| 3.5 取食不同寄主梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶基因表达量 | 第50-55页 |
| 3.5.1 引物的特异性和扩增效率 | 第50-51页 |
| 3.5.2 取食不同寄主的不同龄期梨小食心虫的胰蛋白酶基因表达量 | 第51-55页 |
| 第四章 结论 | 第55-56页 |
| 第五章 讨论 | 第56-60页 |
| 5.1 梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶最适pH | 第56页 |
| 5.2 寄主植物对梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶活性影响 | 第56-57页 |
| 5.3 寄主植物对梨小食心虫生长发育的影响 | 第57-58页 |
| 5.4 寄主植物对梨小食心虫幼虫胰蛋白酶基因表达量的影响 | 第58页 |
| 5.5 梨小食心虫蛋白酶活性与其生长发育的关系 | 第58-59页 |
| 5.6 梨小食心虫蛋白酶活性与幼虫中肠胰蛋白酶基因表达的关系 | 第59页 |
| 5.7 梨小食心虫生长发育与幼虫中肠胰蛋白酶基因表达的关系 | 第59页 |
| 5.8 梨小食心虫胰蛋白酶活性、生长发育与幼虫中肠胰蛋白酶基因表达的关系 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
