| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 一、前言 | 第12-28页 |
| 1.1 Bt蛋白简介及概况 | 第12页 |
| 1.2 Bt蛋白杀虫作用机理 | 第12-15页 |
| 1.3 Bt蛋白增效物质的国内外研究现状 | 第15-23页 |
| 1.3.1 几丁质酶(Chitinase) | 第15-16页 |
| 1.3.2 Cyt蛋白 | 第16页 |
| 1.3.3 营养期杀虫蛋白(VIPs) | 第16-17页 |
| 1.3.4 辅助蛋白(Accessary Proteins) | 第17-18页 |
| 1.3.5 双效菌素(Zwittermicn A,ZwA) | 第18页 |
| 1.3.6 钙粘蛋白(Cadherin) | 第18-19页 |
| 1.3.7 碱性磷酸酶(ALP) | 第19-20页 |
| 1.3.8 氨肽酶氮(APN) | 第20-21页 |
| 1.3.9 丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine proteinase inhibitor) | 第21-22页 |
| 1.3.10 昆虫病毒增效蛋白(insect viruses enhancin protein) | 第22-23页 |
| 1.4 昆虫对Bt毒素抗性机制的研究概况 | 第23-25页 |
| 1.5 本研究的主要目的及意义 | 第25-28页 |
| 1.5.1 选题依据 | 第25-26页 |
| 1.5.2 本研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 1.5.3 本研究技术路线 | 第27-28页 |
| 二、材料与方法 | 第28-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第28-33页 |
| 2.1.1 试验菌株、质粒和引物 | 第28-30页 |
| 2.1.2 培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.3 扩大培养细菌所用抗生素及温度 | 第31页 |
| 2.1.4 试剂和仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.5 供试昆虫 | 第32-33页 |
| 2.2 试验方法 | 第33-41页 |
| 2.2.1 常规的DNA操作 | 第33-35页 |
| 2.2.2 小菜蛾RNA的提取及cDNA的合成 | 第35-36页 |
| 2.2.3 重组质粒的转化及阳性克隆的筛选 | 第36-37页 |
| 2.2.4 蛋白的SDS-PAGE电泳及其浓度的测定 | 第37-39页 |
| 2.2.5 小菜蛾五个受体片段的表达与纯化 | 第39页 |
| 2.2.6 生物测定 | 第39-41页 |
| 三、目的片段的选择、克隆、表达及纯化 | 第41-80页 |
| 3.1 小菜蛾五个受体目的片段的选择 | 第41-42页 |
| 3.1.1 小菜蛾钙粘片段PxCAD-1 | 第41页 |
| 3.1.2 小菜蛾钙粘片段PxCAD-2 | 第41-42页 |
| 3.1.3 小菜蛾钙粘片段PxCAD-3 | 第42页 |
| 3.1.4 小菜蛾氨肽酶氮片段PxAPN1 | 第42页 |
| 3.1.5 小菜蛾碱性磷酸酶片段PxALP0 | 第42页 |
| 3.2 小菜蛾五个受体片段的克隆 | 第42-54页 |
| 3.2.1 梯度PCR | 第42-44页 |
| 3.2.2 琼脂糖凝胶回收 | 第44-46页 |
| 3.2.3 连接pEASY-T1载体并转化 | 第46-47页 |
| 3.2.4 挑取单菌落PCR阳性初鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2.5 测序比对分析 | 第49-52页 |
| 3.2.6 目的片段与pEASY-T1载体重组质粒的提取 | 第52-54页 |
| 3.3 重组蛋白的表达 | 第54-76页 |
| 3.3.1 目的片段与pEASY-T1载体重组质粒的双酶切 | 第54-56页 |
| 3.3.2 连接表达载体pGEX-6p-1并转化 | 第56-57页 |
| 3.3.3 菌落PCR或酶切鉴定 | 第57-59页 |
| 3.3.4 小菜蛾的五个目的片段与载体pGEX-6p-1的图谱构建 | 第59-62页 |
| 3.3.5 CrylAc晶体蛋白的提取及总蛋白表达的检测 | 第62-63页 |
| 3.3.6 诱导表达条件的优化 | 第63-76页 |
| 3.4 表达重组蛋白的纯化 | 第76-80页 |
| 四、五个多肽片段的增效作用分析 | 第80-84页 |
| 4.1 蛋白标准曲线的制定 | 第80页 |
| 4.2 重组蛋白浓度的定量 | 第80-81页 |
| 4.3 生测准备及试验处理 | 第81-82页 |
| 4.4 试虫死亡率数据统计结果与分析 | 第82-84页 |
| 五、讨论 | 第84-87页 |
| 5.1 钙粘蛋白片段(CAD) | 第84-85页 |
| 5.2 氨肽酶氮片段(APN) | 第85页 |
| 5.3 碱性磷酸酶片段(ALP) | 第85-87页 |
| 六、结论 | 第87-89页 |
| 6.1 本研究的主要内容 | 第87页 |
| 6.2 创新点 | 第87-88页 |
| 6.3 研究展望及问题 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 附录 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 作者简历 | 第98页 |
