| 中文摘要 | 第12-17页 |
| ABSTRACT | 第17-21页 |
| 符号说明 | 第22-24页 |
| 第一章 前言 | 第24-36页 |
| 1 视网膜新生血管疾病 | 第24-29页 |
| 1.1 视网膜简介 | 第24页 |
| 1.2 视网膜新生血管 | 第24-26页 |
| 1.3 临床治疗方法 | 第26-29页 |
| 2 内皮抑素 | 第29-31页 |
| 2.1 内皮抑素起源 | 第29-30页 |
| 2.2 内皮抑素的结构与性质 | 第30页 |
| 2.3 内皮抑素的生物学功能 | 第30-31页 |
| 2.4 内皮抑素存在的问题及改进方法 | 第31页 |
| 3 细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs) | 第31-33页 |
| 3.1 细胞穿膜肽的定义及结构 | 第31-32页 |
| 3.2 Tat蛋白转导域(Tat prtotein transduction domain,Tat PTD) | 第32-33页 |
| 4 RGD(Arg-Gly-Asp,精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸) | 第33-34页 |
| 4.1 整合素(Integrin) | 第33-34页 |
| 4.2 RGD | 第34页 |
| 5 本课题设计思路及拟解决问题 | 第34-36页 |
| 第二章 重组蛋白的制备 | 第36-60页 |
| 1 材料 | 第36-39页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第36页 |
| 1.2 培养基及常用溶液的配制 | 第36-38页 |
| 1.3 试剂与材料 | 第38-39页 |
| 1.4 仪器设备 | 第39页 |
| 2. 实验方法 | 第39-48页 |
| 2.1 表达载体pET28a(+)-Es、pET28a(+)-Tat PTD-Es、pET28a(+)-Es-RGD和pET28a(+)-TatPTD-Es-RGD的构建 | 第39-40页 |
| 2.2 目的基因的构建 | 第40-42页 |
| 2.3 目的基因的克隆 | 第42-44页 |
| 2.4 重组质粒转化至E.coli Origami2(DE3)受态细胞 | 第44-45页 |
| 2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第45-46页 |
| 2.6 从菌体裂解液中纯化重组蛋白 | 第46-47页 |
| 2.7 从包涵体中纯化重组蛋白 | 第47-48页 |
| 2.8 重组蛋白的鉴定 | 第48页 |
| 3 实验结果 | 第48-57页 |
| 3.1 目的基因PCR条件的摸索 | 第48-49页 |
| 3.2 PCR鉴定E.coli DH5α阳性转化子 | 第49-50页 |
| 3.3 重组质粒的DNA测序 | 第50页 |
| 3.4 E.coli Origami2(DE3)阳性菌株的鉴定 | 第50-53页 |
| 3.5 从可溶表达中纯化重组蛋白 | 第53-54页 |
| 3.6 从包涵体中纯化重组蛋白 | 第54-57页 |
| 3.7 重组蛋白的鉴定 | 第57页 |
| 4. 讨论 | 第57-59页 |
| 5. 结论 | 第59-60页 |
| 第三章 Tat PTD-Es-RGD的体外活性及体外穿透眼球屏障的能力研究 | 第60-80页 |
| 1 实验材料 | 第60-62页 |
| 1.1 细胞株及种蛋 | 第60页 |
| 1.2 常用溶液配制方法 | 第60-61页 |
| 1.3 试剂与材料 | 第61页 |
| 1.4 仪器设备 | 第61-62页 |
| 2. 实验方法 | 第62-70页 |
| 2.1 CCK-8法测定重组蛋白对内皮细胞EAHY926增殖的影响 | 第62-63页 |
| 2.2 重组蛋白对CAM血管生成的影响 | 第63-64页 |
| 2.3 重组蛋白对内皮细胞EAHY926迁移的影响 | 第64-65页 |
| 2.4 重组蛋白对体外血管生成的影响 | 第65页 |
| 2.5 重组蛋白穿透眼球屏障体外模型的能力 | 第65-68页 |
| 2.6 Tat PTD-Es-RGD对整合素α_vβ_3的亲和性 | 第68-70页 |
| 3. 实验结果 | 第70-77页 |
| 3.1 重组蛋白对EAHY926细胞增殖的影响 | 第70页 |
| 3.2 重组蛋白对CAM血管生成的影响 | 第70-71页 |
| 3.3 重组蛋白对内皮细胞迁移作用的影响 | 第71-72页 |
| 3.4 重组蛋白对血管生成的影响 | 第72-73页 |
| 3.5 重组蛋白体外穿透眼球屏障的能力 | 第73-75页 |
| 3.6 Tat PTD-Es-RGD对RMEC表面整合素α_vβ_3的亲和作用 | 第75-77页 |
| 4. 讨论 | 第77-79页 |
| 5. 结论 | 第79-80页 |
| 第四章 Tat PTD-Es-RGD眼部药代动力学及药效学研究 | 第80-95页 |
| 1. 实验材料 | 第80-82页 |
| 1.1 实验动物 | 第80页 |
| 1.2 常用溶液配制方法 | 第80-81页 |
| 1.3 试剂与材料 | 第81页 |
| 1.4 实验所用仪器设备 | 第81-82页 |
| 2 实验方法 | 第82-85页 |
| 2.1 重组蛋白眼部药代动力学研究 | 第82页 |
| 2.2 重组蛋白对氧致视网膜病变(OIR)的作用 | 第82-85页 |
| 3. 结果 | 第85-93页 |
| 3.1 重组蛋白眼部药代动力学结果 | 第85-87页 |
| 3.2 重组蛋白对OIR的治疗结果 | 第87-93页 |
| 4. 讨论 | 第93-94页 |
| 5. 结论 | 第94-95页 |
| 第五章 重组蛋白抗肿瘤转移活性的研究 | 第95-104页 |
| 1. 实验材料 | 第95-96页 |
| 1.1 动物及细胞 | 第95页 |
| 1.2 常用溶液配制方法 | 第95页 |
| 1.3 试剂与材料 | 第95-96页 |
| 1.4 实验所用仪器设备 | 第96页 |
| 2. 实验方法 | 第96-97页 |
| 2.1 B16-F10黑色素瘤细胞培养 | 第96页 |
| 2.2 小鼠黑色素瘤人工肺转移模型建立 | 第96页 |
| 2.3 给药方法 | 第96页 |
| 2.4 检测指标 | 第96-97页 |
| 3 实验结果 | 第97-102页 |
| 3.1 小鼠体重分析 | 第97-98页 |
| 3.2 重组蛋白对小鼠肺组织表面肿瘤结节数的影响 | 第98-100页 |
| 3.3 小鼠肺组织肿瘤结节HE病理染色结果 | 第100页 |
| 3.4 小鼠肺组织肿瘤结节处CD34的表达 | 第100-102页 |
| 4 讨论 | 第102-103页 |
| 5 结论 | 第103-104页 |
| 总结与展望 | 第104-106页 |
| 1 全文结论 | 第104-105页 |
| 2 创新点 | 第105页 |
| 3 展望 | 第105-106页 |
| 附录 | 第106-110页 |
| 参考文献 | 第110-123页 |
| Article 1 | 第123-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 博士期间发表的论文 | 第135-136页 |
| 附件 | 第136页 |
