| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 课题背景 | 第11-23页 |
| ·人参皂苷生物合成 | 第11-14页 |
| ·人参皂苷概述 | 第11-12页 |
| ·人参皂苷的生物合成 | 第12-14页 |
| ·多酶组装 | 第14-18页 |
| ·多酶组装概述 | 第14-15页 |
| ·多酶组装策略 | 第15-18页 |
| ·双分子荧光互补 | 第18-19页 |
| ·双分子荧光互补原理 | 第18页 |
| ·双分子荧光互补的应用 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母发酵条件优化 | 第19-21页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母发酵影响因素 | 第20-21页 |
| ·本课题研究目的及内容 | 第21-23页 |
| 第2章 毕赤酵母中导入和强化达玛烯二醇生物合成途径 | 第23-53页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23-29页 |
| ·质粒与菌株 | 第23-24页 |
| ·引物序列 | 第24-25页 |
| ·主要培养基 | 第25-27页 |
| ·主要贮存液 | 第27页 |
| ·主要生化试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·主要应用软件、网站 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-41页 |
| ·大肠杆菌分子生物学操作 | 第29-37页 |
| ·毕赤酵母分子生物学操作 | 第37-39页 |
| ·毕赤酵母摇瓶发酵培养 | 第39页 |
| ·重组蛋白表达检测 | 第39-40页 |
| ·目的产物提取与鉴定 | 第40-41页 |
| ·结果讨论 | 第41-52页 |
| ·获取角鲨烯环氧酶(ERG1)和达玛烯二醇合酶(PgDDS)基因 | 第41页 |
| ·构建ERG1与PgDDS共表达载体 | 第41-42页 |
| ·构建ERG1与PgDDS融合表达载体 | 第42-43页 |
| ·构建ERG1与PgDDS通过相互作用蛋白组装表达载体 | 第43-44页 |
| ·表达载体转化毕赤酵母GS115感受态与筛选高拷贝子 | 第44-46页 |
| ·发酵表达重组菌株 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白 | 第47-48页 |
| ·提取与检测产物达玛烯二醇 | 第48-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第3章 双分子荧光互补方法验证蛋白组装 | 第53-61页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53-55页 |
| ·质粒与菌株 | 第53-54页 |
| ·引物序列 | 第54页 |
| ·主要培养基 | 第54页 |
| ·主要贮存液 | 第54页 |
| ·主要生化试剂 | 第54-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·主要应用软件、网站 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·双分子荧光互补 | 第55页 |
| ·毕赤酵母细胞荧光检测 | 第55-56页 |
| ·结果讨论 | 第56-60页 |
| ·表达载体转化毕赤酵母GS115感受态与筛选高拷贝子 | 第57-58页 |
| ·定量测定重组毕赤酵母的细胞荧光强度 | 第58-59页 |
| ·可视化检测重组毕赤酵母的细胞荧光 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第4章 毕赤酵母摇瓶水平发酵优化 | 第61-69页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·菌株 | 第61页 |
| ·主要培养基 | 第61-63页 |
| ·主要贮存液 | 第63页 |
| ·主要生化试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器设备 | 第63页 |
| ·主要应用软件、网站 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-64页 |
| ·毕赤酵母摇瓶发酵条件优化 | 第63-64页 |
| ·目的产物提取与鉴定 | 第64页 |
| ·结果讨论 | 第64-68页 |
| ·重组毕赤酵母诱导温度的优化 | 第64-65页 |
| ·重组毕赤酵母诱导pH的优化 | 第65页 |
| ·重组毕赤酵母诱导甲醇浓度的优化 | 第65-67页 |
| ·缓冲最小培养基 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第5章 总结与展望 | 第69-71页 |
| ·课题总结 | 第69页 |
| ·课题展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第79页 |
