| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-24页 |
| ·概述 | 第13-14页 |
| ·HA理化性质 | 第14页 |
| ·HA的分子量 | 第14-15页 |
| ·HA的合成 | 第15-16页 |
| ·HA的应用 | 第16-17页 |
| ·HA的生产工艺 | 第17-18页 |
| ·动物组织制备HA方法 | 第17-18页 |
| ·微生物制备HA方法 | 第18页 |
| ·HA生产菌种 | 第18-19页 |
| ·马链球菌兽疫亚种毒力因子 | 第19-21页 |
| ·溶血素-S | 第19-20页 |
| ·细菌表面蛋白 | 第20页 |
| ·菌体透明质酸分解酶 | 第20-21页 |
| ·甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) | 第21页 |
| ·溶血素Hylc | 第21页 |
| ·课题研究内容和意义 | 第21-22页 |
| ·实验技术路线 | 第22-24页 |
| 第2章 溶血素-S缺失突变菌株的构建 | 第24-46页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第24页 |
| ·实验试剂与仪器 | 第24-25页 |
| ·培养基和试剂配制 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-39页 |
| ·马链球菌兽疫亚种基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·DH5α感受态细胞的制作方法 | 第28页 |
| ·马链球菌兽疫亚种感受态细胞的制作方法 | 第28-29页 |
| ·sagA缺失突变菌株的构建 | 第29-35页 |
| ·马链球菌兽疫亚种sagA基因缺失突变菌的确认 | 第35-36页 |
| ·sagA基因缺失回复菌的构建 | 第36-37页 |
| ·sagA基因缺失回复菌的确认 | 第37页 |
| ·构建菌株遗传稳定性考察 | 第37-38页 |
| ·进一步确认马链球菌兽疫亚种sagA基因缺失菌和回复菌构建成功 | 第38-39页 |
| ·实验结果与讨论 | 第39-44页 |
| ·PCR扩增sagA基因 | 第39页 |
| ·限制性内切酶ClaI酶切PCR产物和质粒pJR700 | 第39-40页 |
| ·携带sagA基因载体pYL1(pJR-sagA)的构建 | 第40-41页 |
| ·sagA基因缺失质粒载体pYL2(pJR△sagA)的构建 | 第41-42页 |
| ·sagA基因缺失突变菌的构建 | 第42-43页 |
| ·sagA基因缺失回复菌的构建 | 第43页 |
| ·血平板和SLS测定进一步确认sagA基因缺失突变菌和回复菌的构建 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第3章 sagA基因缺失突变菌特性研究 | 第46-61页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·菌种 | 第46页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第46-47页 |
| ·主要实验试剂的配置 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·透明质酸产量和分子量的测定 | 第48-49页 |
| ·菌体表面蛋白的测定 | 第49页 |
| ·菌体溶血素Hylc的测定 | 第49-50页 |
| ·菌体透明质酸分解酶的测定 | 第50页 |
| ·菌体甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的测定 | 第50页 |
| ·HepG2细胞毒性实验 | 第50-51页 |
| ·数据处理及分析方法 | 第51页 |
| ·实验结果与讨论 | 第51-60页 |
| ·sagA基因缺失对菌株HA的影响 | 第51-56页 |
| ·sagA基因缺失对菌株其它毒力因子的影响 | 第56-59页 |
| ·HepG2细胞毒性试验 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第4章 发酵工艺的优化 | 第61-76页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·菌种 | 第61页 |
| ·实验试剂与仪器 | 第61-63页 |
| ·发酵条件及透明质酸测定 | 第63页 |
| ·培养基配方 | 第63页 |
| ·发酵条件 | 第63页 |
| ·透明质酸含量的测定 | 第63页 |
| ·种子培养基种龄的确定 | 第63-64页 |
| ·发酵培养基配方及培养条件的优化 | 第64-66页 |
| ·接种量对透明质酸产量的影响 | 第64页 |
| ·碳源对透明质酸产量的影响 | 第64页 |
| ·氮源对透明质酸产量的影响 | 第64页 |
| ·正交实验对培养基配方进行优化 | 第64-65页 |
| ·培养基pH对透明质酸产量的影响 | 第65页 |
| ·培养基装样量对透明质酸产量的影响 | 第65页 |
| ·温度对透明质酸产量的影响 | 第65页 |
| ·摇床转速对透明质酸产量的影响 | 第65-66页 |
| ·实验结果与讨论 | 第66-74页 |
| ·种龄的确定 | 第66页 |
| ·接种量对透明质酸产量的影响 | 第66-67页 |
| ·碳源对透明质酸产量的影响 | 第67-68页 |
| ·氮源对透明质酸产量的影响 | 第68-69页 |
| ·最佳培养基配方的确定 | 第69-70页 |
| ·pH对透明质酸产量的影响 | 第70-71页 |
| ·装样量对透明质酸产量的影响 | 第71-72页 |
| ·温度对透明质酸产量的影响 | 第72-73页 |
| ·摇床转速对透明质酸产量的影响 | 第73-74页 |
| ·本章小结 | 第74-76页 |
| 结论 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果 | 第83页 |
