| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 天祝白牦牛 | 第10页 |
| 2 转铁蛋白 | 第10-15页 |
| ·转铁蛋白的结构 | 第11-12页 |
| ·转铁蛋白的功能 | 第12-13页 |
| ·转铁蛋白的应用 | 第13-15页 |
| 3 本研究目的及意义 | 第15-17页 |
| 第二章 天祝白牦牛转铁蛋白(Tf)基因克隆及生物信息学分析 | 第17-34页 |
| 1 天祝白牦牛转铁蛋白(Tf)基因克隆 | 第17-22页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| 2 结果与分析 | 第22-30页 |
| ·天祝白牦牛Tf基因CDS区扩增 | 第22页 |
| ·Tf与PMD-18T载体的连接及鉴定结果 | 第22-25页 |
| ·天祝白牦牛Tf基因编码区序列及蛋白分析 | 第25-30页 |
| ·基因蛋白理化性质分析 | 第25页 |
| ·基因蛋白二级结构与三级结构预测 | 第25-26页 |
| ·基因蛋白的保守结构域 | 第26-28页 |
| ·蛋白基因跨膜结构与亲疏水性分析 | 第28页 |
| ·细胞定位 | 第28-29页 |
| ·蛋白基因磷酸化与糖基化位点分析 | 第29-30页 |
| ·天祝白牦牛Tf基因及其编码蛋白与其他物种同源性比较 | 第30页 |
| 3 讨论 | 第30-33页 |
| 4 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 牦牛重组转铁蛋白pET-30a-Tf诱导表达及产物纯化 | 第34-55页 |
| 1 实验材料 | 第34-35页 |
| ·仪器设备 | 第34页 |
| ·菌种、质粒及主要试剂 | 第34页 |
| ·其他试剂 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-42页 |
| ·密码子优化转铁蛋白基因编码区 | 第35页 |
| ·优化后的目的基因克隆 | 第35-36页 |
| ·牦牛转铁蛋白重组原核表达载体PET-30a-Tf的构建 | 第36-39页 |
| ·重组子PGH-DT1219-Tf的酶切及纯化 | 第36页 |
| ·PET-30a载体的酶切及纯化 | 第36-37页 |
| ·外源DNA片段和载体连接 | 第37页 |
| ·重组质粒的转化 | 第37页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组子的测序 | 第38-39页 |
| ·重组工程菌的诱导表达及表达条件优化 | 第39页 |
| ·挑斑诱导表达及条件优化 | 第39-40页 |
| ·表达时间的优化 | 第39页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第39-40页 |
| ·诱导温度的优化 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE鉴定表达结果 | 第40页 |
| ·转铁蛋白Tf的放大 | 第40-41页 |
| ·转铁蛋白Tf的纯化 | 第41-42页 |
| ·转铁蛋白Tf亲和层析纯化 | 第41页 |
| ·转铁蛋白Tf离子交换层析纯化 | 第41-42页 |
| ·转铁蛋白Tf的检测 | 第42页 |
| ·Western Blotting检测 | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-51页 |
| ·密码子优化的Tf基因 | 第42-43页 |
| ·重组原核表达载体PET-30a-Tf的构建 | 第43-46页 |
| ·重组质粒PGH-DT1219-Tf的双酶切 | 第44页 |
| ·重组子PET-30a-Tf的构建 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE鉴定重组子PET-30a-Tf的表达 | 第46-47页 |
| ·转铁蛋白Tf亲和层析纯化 | 第47-48页 |
| ·转铁蛋白Tf离子交换层析纯化 | 第48-49页 |
| ·转铁蛋白Tf的检测 | 第49-51页 |
| ·Western Blotting检测结果 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| ·重组子的构建及大肠杆菌原核表达系统 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白原核表达及蛋白纯化 | 第52-54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 第四章 全文结论 | 第55-56页 |
| 1 天祝白牦牛转铁蛋白(Tf)基因克隆 | 第55页 |
| 2 重组牦牛转铁蛋白的原核表达 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 1 在学期间的研究成果及参加的科研项目清单 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
