| 摘要 | 第1-5页 |
| abstract | 第5-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-19页 |
| ·概述 | 第13页 |
| ·纤维素酶的研究现状 | 第13-15页 |
| ·纤维素酶的组成及作用机制 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶来源及其特征 | 第14页 |
| ·纤维素酶对畜牧行业的影响 | 第14-15页 |
| ·产纤维素酶枯草芽孢杆菌的研究进展 | 第15-16页 |
| ·枯草芽孢杆菌的概况 | 第15页 |
| ·产纤维素酶枯草芽孢杆菌的研究 | 第15-16页 |
| ·利用基因工程技术构建降解纤维素工程菌 | 第16-19页 |
| ·基因工程研究进展 | 第16页 |
| ·纤维素酶基因工程菌研究进展 | 第16-19页 |
| 第2章 产纤维素酶枯草芽孢杆菌的筛选 | 第19-31页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·样品来源及培养基 | 第19页 |
| ·主要试剂及配制方法 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-24页 |
| ·样品的处理 | 第21页 |
| ·产纤维素酶菌株的筛选与纯化 | 第21页 |
| ·复筛 | 第21页 |
| ·纤维素酶活力测定 | 第21-22页 |
| ·菌株的形态学鉴定 | 第22-23页 |
| ·菌株的生理生化鉴定 | 第23页 |
| ·菌种 16S rDNA分子鉴定 | 第23-24页 |
| ·结果 | 第24-28页 |
| ·产酶菌株的初筛 | 第24-25页 |
| ·酶活复筛 | 第25-26页 |
| ·菌株的形态学鉴定结果 | 第26页 |
| ·菌株的生理生化鉴定结果 | 第26-27页 |
| ·菌种 16S rDNA分子鉴定 | 第27页 |
| ·基于 16S rDNA序列及系统进化树分析 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第3章 内切葡聚糖酶基因的克隆、表达及其酶活性检测 | 第31-49页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·菌种和质粒 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-41页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第33-37页 |
| ·重组质粒的酶切及PCR鉴定 | 第37页 |
| ·Cel042基因序列测定及分析 | 第37-38页 |
| ·pET32a-Cel042表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·重组质粒p ET32a-Cel042的融合表达 | 第39-40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第40-41页 |
| ·酶活性测定 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-47页 |
| ·PCR扩增 | 第41页 |
| ·重组质粒p MD18-T-Cel042的PCR及酶切鉴定 | 第41-43页 |
| ·Cel042序列测定与分析 | 第43-46页 |
| ·系统进化树分析 | 第46页 |
| ·重组表达载体的PCR及酶切鉴定 | 第46页 |
| ·重组大肠杆菌的表达 | 第46-47页 |
| ·酶活力检测 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第4章 β-1, 3-1, 4 葡聚糖酶基因的克隆、表达及其酶活性检测 | 第49-61页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-54页 |
| ·β-1, 3-1, 4-葡聚糖酶基因的克隆 | 第49-51页 |
| ·重组质粒的酶切及PCR鉴定 | 第51页 |
| ·Cel22 基因序列测定及分析 | 第51-52页 |
| ·pET32a-Cel22表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·重组质粒p ET32a-Cel22的融合表达 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-59页 |
| ·PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·重组质粒p MD18-T-Cel22的酶切及PCR鉴定 | 第55页 |
| ·Cel22序列测定及同源性分析 | 第55-57页 |
| ·系统进化树分析 | 第57页 |
| ·重组表达载体的PCR及酶切鉴定 | 第57-59页 |
| ·重组大肠杆菌的表达 | 第59页 |
| ·酶活力检测 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第5章 双纤维素酶基因在大肠杆菌中的融合表达及其酶学性质 | 第61-73页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·菌株及质粒 | 第61页 |
| ·酶及试剂 | 第61-62页 |
| ·主要仪器 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| ·引物设计 | 第63页 |
| ·Cel042和Cel22基因的克隆 | 第63页 |
| ·Cel042基因和Cel22基因的连接 | 第63-64页 |
| ·重组质粒PCR及酶切鉴定 | 第64页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·重组质粒的pET32a-Cel042-Cel22融合表达 | 第65页 |
| ·酶活性测定 | 第65-66页 |
| ·酶学性质分析 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-70页 |
| ·pMD18-T-Cel042-Cel22重组质粒PCR及酶切鉴定 | 第66-67页 |
| ·重组表达载体p ET32a-Cel042-Cel22的酶切及PCR鉴定 | 第67页 |
| ·融合蛋白的表达及酶活性测定 | 第67-69页 |
| ·酶学性质分析 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第6章 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录 配制SDS-PAGE凝胶所用体系 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第83页 |
