| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-23页 |
| ·PRRS概述 | 第14页 |
| ·PRRSV病原学 | 第14页 |
| ·PRRSV分子生物学特性 | 第14-17页 |
| ·PRRSV基因组结构 | 第14-15页 |
| ·PRRSV非结构蛋白 | 第15页 |
| ·PRRSV结构蛋白 | 第15-17页 |
| ·PRRSV NSP2研究进展 | 第17-21页 |
| ·NSP2结构和功能 | 第17-18页 |
| ·NSP2的变异 | 第18-19页 |
| ·NSP2与PRRSV毒力 | 第19-20页 |
| ·NSP2与免疫 | 第20-21页 |
| ·NSP2与疫苗 | 第21页 |
| ·研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·病料 | 第23页 |
| ·病毒、菌株与载体 | 第23页 |
| ·细胞与实验动物 | 第23页 |
| ·实验药品、试剂及标准参照物 | 第23-24页 |
| ·实验试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-41页 |
| ·PRRSV分离和培养 | 第26页 |
| ·PRRSV IFA鉴定 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·PRRSV总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·NSP2基因RT-PCR | 第28-29页 |
| ·NSP2 PCR产物的纯化 | 第29页 |
| ·NSP2基因的克隆和鉴定 | 第29-31页 |
| ·NSP2序列遗传进化分析 | 第31-33页 |
| ·NSP2重组表达质粒构建 | 第33页 |
| ·NSP2重组表达质粒鉴定 | 第33-34页 |
| ·NSP2重组蛋白诱导表达 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白纯化、复性与活性鉴定 | 第35-36页 |
| ·抗NSP2多克隆抗体的制备 | 第36页 |
| ·抗NSP2多克隆抗体的生物学活性检测 | 第36-37页 |
| ·Real-time PCR检测抗NSP2多抗对PRRSV抑制作用 | 第37-39页 |
| ·美洲型PRRSV NSP2基因重组分析 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-69页 |
| ·PRRSV分离和培养 | 第41-42页 |
| ·PRRSV IFA检测 | 第42-43页 |
| ·NSP2基因RT-PCR扩增和鉴定 | 第43页 |
| ·NSP2基因的克隆和鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组克隆质粒PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·测序及序列比对 | 第44-45页 |
| ·NSP2遗传进化分析 | 第45-47页 |
| ·NSP2重组表达质粒鉴定 | 第47-49页 |
| ·重组原核表达质粒鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组真核表达质粒鉴定 | 第48-49页 |
| ·NSP2重组蛋白表达 | 第49-50页 |
| ·NSP2重组蛋白纯化和活性鉴定 | 第50-51页 |
| ·抗NSP2多克隆抗体生物学活性检测 | 第51-55页 |
| ·间接ELISA检测多抗效价 | 第51-52页 |
| ·Western-blot检测 | 第52-53页 |
| ·多抗对细胞感染PRRSV的IFA检测 | 第53-54页 |
| ·多抗对细胞瞬时表达NSP2蛋白IFA检测 | 第54-55页 |
| ·Real-time PCR检测抗nps2多抗对PRRSV抑制作用 | 第55-56页 |
| ·标准质粒与实时引物的PCR鉴定 | 第55页 |
| ·标准曲线 | 第55-56页 |
| ·多抗对PRRSV抑制效果 | 第56页 |
| ·美洲型PRRSV NSP2基因重组分析 | 第56-69页 |
| ·RDP4.2 软件对PRRSV NSP2重组事件检测结果 | 第56-57页 |
| ·SIMPLOT软件对重组毒株NSP2遗传相似性分析结果 | 第57-63页 |
| ·重组毒株NSP2遗传进化分析结果 | 第63-69页 |
| 4 讨论 | 第69-73页 |
| ·PRRSV分离、培养和鉴定 | 第69页 |
| ·NSP2的克隆和序列分析 | 第69-70页 |
| ·NSP2的原核表达及抗血清制备 | 第70-71页 |
| ·美洲型PRRSV NSP2重组分析 | 第71-73页 |
| 5 结论 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 附录 | 第85-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第89页 |
