| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 实验流程及技术路线 | 第13-14页 |
| 第一部分 重组牛胰酶基因真核表达载体的构建及瞬时转染 MDCK细胞的功能研究 | 第14-38页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 一、实验材料 | 第15-16页 |
| 二、实验方法 | 第16-27页 |
| 三、结果 | 第27-33页 |
| 1. 目的基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2. 重组表达载体的鉴定 | 第28-29页 |
| 3. 瞬时转染 MDCK 细胞的表达鉴定 | 第29-31页 |
| 4. 瞬时转染表达目的蛋白酶活性检测 | 第31-33页 |
| 四、讨论 | 第33-37页 |
| 五、小结 | 第37-38页 |
| 第二部分 稳定表达分泌型胰酶原 MDCK 单克隆细胞的筛选及鉴定 | 第38-50页 |
| 引言 | 第38页 |
| 一、实验材料 | 第38-39页 |
| 二、实验方法 | 第39-42页 |
| 三、结果 | 第42-47页 |
| 1. 筛选培养基中 G418 浓度的选择 | 第42-43页 |
| 2. 有限稀释法筛选单克隆细胞 | 第43页 |
| 3. MT21 基因组的 PCR 和 RT-PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| 4. MT21 细胞株目的蛋白的表达鉴定 | 第44-45页 |
| 5. 连续传代单克隆株基因组的 PCR 和 RT-PCR 鉴定 | 第45-46页 |
| 6. 连续传代单克隆细胞表达目的蛋白的酶活性检测 | 第46-47页 |
| 四、讨论 | 第47-49页 |
| 五、小结 | 第49-50页 |
| 第三部分 流感病毒在稳定表达胰酶原的 MDCK 细胞上的增殖特性研究 | 第50-63页 |
| 引言 | 第50页 |
| 一、实验材料 | 第50-51页 |
| 二、实验方法 | 第51-54页 |
| 三、结果 | 第54-59页 |
| 1. 接种毒株 CCID_50滴度检测 | 第54页 |
| 2. 不同病毒株的细胞培养 | 第54-59页 |
| ·野毒株 A/天津津南/15/2009(H1N1) | 第55-56页 |
| ·野毒株 A/福建同安/196/2009(H3N2) | 第56-57页 |
| ·野毒株 B/黑龙江呼兰/116/201053 | 第57-58页 |
| ·疫苗株 A/California/2009(H1N1) | 第58-59页 |
| 3. Western blot 鉴定不同细胞中 HA 的裂解情况 | 第59页 |
| 四、讨论 | 第59-62页 |
| 五、小结 | 第62-63页 |
| 全文总结 | 第63页 |
| 后续需解决的问题及工作计划 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 综述：流感病毒血凝素蛋白裂解机制的研究进展 | 第70-76页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 缩略语表 | 第76-78页 |
| 附录一 测序比对结果 | 第78-81页 |
| 附录二 pcDNA3.1 载体图谱 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
