| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 一、前言 | 第10-23页 |
| 1. 成纤维细胞生长因子的来源及分类 | 第10-11页 |
| 2. 成纤维细胞生长因子23概况 | 第11-15页 |
| ·FGF23的分子结构 | 第11-12页 |
| ·FGF23与其受体 | 第12-13页 |
| ·FGF23的来源 | 第13页 |
| ·FGF23的生理功能 | 第13-14页 |
| ·与FGF23相关的疾病 | 第14页 |
| ·成纤维生长因子23(FGF23)小结 | 第14-15页 |
| 3. 小分子泛素样修饰蛋白(SUMO) | 第15-22页 |
| ·泛素及其功能 | 第15页 |
| ·SUMO的种类及其结构 | 第15-17页 |
| ·SUMO的功能 | 第17-19页 |
| ·SUMO的作用机理 | 第19-22页 |
| 4. 技术路线图 | 第22-23页 |
| 二、实验设备、材料 | 第23-29页 |
| 1. 实验设备 | 第23-24页 |
| 2. 实验材料 | 第24-25页 |
| ·常用试剂 | 第24页 |
| ·DNA及原核表达载体 | 第24页 |
| ·实验菌株 | 第24页 |
| ·工具酶 | 第24-25页 |
| ·分子量参照物 | 第25页 |
| 3. 试剂配制 | 第25-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第25页 |
| ·蛋白质电泳试剂 | 第25-27页 |
| ·培养基与抗生素 | 第27-28页 |
| ·蛋白纯化溶液 | 第28-29页 |
| 三、试验方法与步骤 | 第29-38页 |
| 1. PCR扩增 | 第29-32页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·引物溶液的配置 | 第29页 |
| ·PCR扩增融合SUMO-FGF23~(CORE)基因 | 第29-32页 |
| 2. PET22B-SUMO-FGF23~(CORE)DNA表达重组因子的构建和序列分析 | 第32-35页 |
| ·表达载体pET22b的提抽 | 第32页 |
| ·PCR扩增产物SUMO-FGF23~(CORE) DNA和表达载体pET22b的双酶切 | 第32-33页 |
| ·酶切产物的回收 | 第33页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的制备 | 第33页 |
| ·连接反应 | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·重组子的鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒SUMO-FGF23~(CORE)DNA的抽提 | 第34页 |
| ·感受态大肠杆菌ROSETTA的制备 | 第34-35页 |
| ·重组质粒SUMO-FGF23~(CORE)DNA的转化 | 第35页 |
| 3. PET22B-SUMO-FGF23~(CORE)DNA在大肠杆菌中的表达 | 第35-36页 |
| ·SUMO-FGF23~(CORE)DNA表达菌的筛选 | 第35页 |
| ·最佳表达条件的筛选 | 第35页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的配置 | 第35页 |
| ·蛋白样品的配置 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE | 第35-36页 |
| 4. SUMO-FGF23~(CORE)DNA表达产物可溶性分析和菌体的超声破碎 | 第36页 |
| 5. SUMO-FGF23~(CERE)的摇瓶发酵,分离纯化、酶切、鉴定 | 第36-38页 |
| ·ROSETTA/pET-22b-SUMO-FGF23~(CORE)的摇瓶发酵 | 第36页 |
| ·Ni-NTA亲和柱纯化 | 第36-37页 |
| ·SUMO-FGF23~(CORE)的酶切 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE | 第37页 |
| ·Western Blotting | 第37-38页 |
| 四、实验结果 | 第38-43页 |
| 1. PCR产物和重组SUMO-FGF23~(CORE)质粒的构建和序列分析 | 第38-39页 |
| 2. SUMO-FGF23~(CORE)在大肠杆菌中的表达 | 第39-41页 |
| 3. SUMO-FGF23~(CORE)的分离纯化 | 第41-42页 |
| 4. SUMO-FGF23~(CORE)的酶切 | 第42页 |
| 5. SUMO-FGF23~(CORE)的鉴定 | 第42-43页 |
| 五、讨论 | 第43-45页 |
| 1. 融合蛋白的表达 | 第43页 |
| 2. 融合蛋白的分离纯化 | 第43-45页 |
| 六、结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
