| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| ·研究目的与意义 | 第11-12页 |
| ·单宁酶的研究现状 | 第12-20页 |
| ·单宁酶的性质 | 第12-16页 |
| ·单宁酶的工业应用 | 第16-18页 |
| ·单宁酶的发酵生产 | 第18-20页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-30页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·菌株和载体 | 第21页 |
| ·酶和主要生物化学试剂 | 第21-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·黑曲霉基因组的提取 | 第24-25页 |
| ·基因克隆 | 第25-27页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉的遗传转化 | 第27-28页 |
| ·重组菌株分泌蛋白检测 | 第28页 |
| ·重组菌株的单宁酶活性测定 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-38页 |
| ·单宁酶基因表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·单宁酶基因的克隆 | 第30-32页 |
| ·单宁酶基因tan黑曲霉表达载体pSZH-tan的构建 | 第32-33页 |
| ·农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第33-34页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第33-34页 |
| ·农杆菌转化子与黑曲霉的共培养 | 第34页 |
| ·黑曲霉转化子的筛选和鉴定 | 第34页 |
| ·tan基因同源重组转化子的筛选 | 第34-35页 |
| ·单宁酶基因重组菌株中的表达 | 第35-38页 |
| ·没食子酸波长确定 | 第35页 |
| ·没食子酸(GA)标准曲线制作 | 第35-36页 |
| ·单宁酶的蛋白活性表达 | 第36-37页 |
| ·摇瓶发酵重组菌株单宁酶活性的测定 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| ·黑曲霉安全高效表达系统的优势 | 第38页 |
| ·单宁酶在黑曲霉中的表达水平 | 第38-40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| ·单宁酶基因黑曲霉表达载体的构建 | 第40页 |
| ·黑曲霉同源重组转化子的筛选 | 第40页 |
| ·同源重组菌株中单宁酶的表达 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 攻读专业硕士学位期间发表的学术论文 | 第47页 |