| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 第一章 综述 | 第16-30页 |
| 1 免疫佐剂的研究进展 | 第16-23页 |
| ·免疫佐剂概述 | 第16页 |
| ·免疫佐剂的作用机理 | 第16-17页 |
| ·常见疫苗免疫佐剂 | 第17-23页 |
| ·免疫佐剂应用展望 | 第23页 |
| 2 Gp96研究进展 | 第23-28页 |
| ·Gp96概述 | 第23-24页 |
| ·Gp96的结构特点及免疫学特性 | 第24-25页 |
| ·Gp96佐剂效应的分子机制 | 第25-27页 |
| ·Gp96在抗感染和抗肿瘤中的应用研究 | 第27-28页 |
| ·Gp96的应用展望 | 第28页 |
| 3 研究目的及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 猪Gp96N的表达与纯化 | 第30-42页 |
| 引言 | 第30页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·实验仪器 | 第30页 |
| ·实验试剂 | 第30-31页 |
| ·菌株及质粒 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-37页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第31页 |
| ·RT-PCR扩增总cDNA | 第31-32页 |
| ·PCR扩增猪Gp96N基因 | 第32页 |
| ·重组质粒pET-32a/Gp96N的构建 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第33页 |
| ·大肠杆菌表达猪Gp96N及蛋白检测 | 第33-35页 |
| ·阴离子交换层析纯化猪Gp96N蛋白 | 第35页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第35-36页 |
| ·猪Gp96N的基因扩增及重组质粒pPICZaA/Gp96N的构建 | 第36页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第36页 |
| ·阳性转化子的筛选与鉴定 | 第36页 |
| ·重组酵母诱导表达猪Gp96N蛋白及检测 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-41页 |
| ·大肠杆菌表达猪Gp96N及目的蛋白的纯化及检测 | 第37-38页 |
| ·酵母菌表达猪Gp96N及目的蛋白的纯化与检测 | 第38-41页 |
| 4 讨论 | 第41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 Gp96N对PRRSV合成肽免疫效果的影响 | 第42-60页 |
| 引言 | 第42页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42-43页 |
| ·病毒和细胞 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-50页 |
| ·PRRSV的B细胞表位和T细胞表位多肽的合成 | 第43-44页 |
| ·蛋白佐剂猪Gp96N的获得 | 第44页 |
| ·病毒粒子纯化 | 第44页 |
| ·实验动物分组及免疫 | 第44-45页 |
| ·攻毒实验 | 第45页 |
| ·间接免疫荧光染色(IFA) | 第45-46页 |
| ·ELISA检测抗体水平 | 第46页 |
| ·病毒-血清中和实验 | 第46页 |
| ·小鼠脾细胞的分离 | 第46-47页 |
| ·病毒滴度(TCID_(50))检测 | 第47页 |
| ·猪PBMC的分离 | 第47页 |
| ·脾淋巴细胞增殖实验 | 第47-48页 |
| ·小鼠IFN-γ/EIISPOT实验 | 第48-49页 |
| ·ELISA检测猪细胞因子 | 第49-50页 |
| ·统计学分析 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-57页 |
| ·PRRSV的B细胞表位和T细胞表位的序列分析 | 第50页 |
| ·PRRSV的B细胞表位合成肽能激活小鼠体液免疫 | 第50-51页 |
| ·猪Gp96N能够增强B细胞表位肽对小鼠的体液免疫效应 | 第51-52页 |
| ·PRRSV的B细胞表位肽能激发猪的体液免疫 | 第52-53页 |
| ·猪Gp96N能够增强B细胞表位肽对猪的体液免疫效应 | 第53-54页 |
| ·猪Gp96N与PRRSV的T细胞表位肽联合免疫能够激活小鼠的细胞免疫 | 第54页 |
| ·猪Gp96N与PRRSV合成肽联合免疫能够激活猪的细胞免疫 | 第54-55页 |
| ·猪Gp96N对PRRSV合成肽免疫效应的增强具有Thl型偏好性 | 第55-57页 |
| ·猪Gp96N对PRRSV合成肽免疫保护力的影响 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 猪Gp96N对PRRSV亚单位疫苗免疫效果的影响 | 第60-73页 |
| 引言 | 第60页 |
| 1 材料 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-64页 |
| ·PRRSV的B细胞表位亚单位疫苗重组质粒的构建 | 第60-63页 |
| ·重组蛋白Cpl、Cp2的表达与检测 | 第63页 |
| ·猪Gp96N蛋白的获得 | 第63页 |
| ·实验动物分组及免疫 | 第63-64页 |
| ·IFA检测PRRSV特异性抗体 | 第64页 |
| ·体液免疫水平检测 | 第64页 |
| ·细胞免疫水平检测 | 第64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-70页 |
| ·筛选出9个抗原性较高的PRRSV的B细胞表位 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白Cpl、Cp2的表达纯化及检测 | 第65-66页 |
| ·Cpl、Cp2能够激发小鼠产生PRRSV特异性抗体 | 第66-67页 |
| ·猪Gp96N能够增强Cp对小鼠的体液免疫效应 | 第67页 |
| ·猪Gp96N能够增强Cp对小鼠的细胞免疫效应 | 第67-68页 |
| ·猪Gp96N能够增强Cp对猪的体液免疫效应 | 第68-69页 |
| ·猪Gp96N能够增强Cp对猪的细胞免疫效应 | 第69-70页 |
| ·猪Gp96N增强PRRSV亚单位疫苗Cp的免疫效应具有Th1型偏好性 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 5 小结 | 第72-73页 |
| 第五章 猪Gp96N对PCV2灭活疫苗免疫效果的影响 | 第73-80页 |
| 引言 | 第73页 |
| 1 材料 | 第73-74页 |
| ·实验仪器 | 第73页 |
| ·实验试剂 | 第73页 |
| ·病毒和细胞 | 第73页 |
| ·实验动物 | 第73-74页 |
| 2 实验方法 | 第74-75页 |
| ·免疫佐剂猪Gp96N蛋白的制备 | 第74页 |
| ·不同剂量猪Gp96N与疫苗联合免疫的制备方法 | 第74页 |
| ·实验动物分组及免疫方案 | 第74页 |
| ·PCV2特异性抗体IgG的检测 | 第74-75页 |
| ·血清细胞因子检测 | 第75页 |
| 3 结论与分析 | 第75-78页 |
| ·猪Gp96N能够增强PCV2灭活疫苗对猪的体液免疫 | 第75页 |
| ·细胞因子检测结果 | 第75-78页 |
| 4 讨论 | 第78-79页 |
| 5 小结 | 第79-80页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第80-82页 |
| 1 结论 | 第80页 |
| 2 创新点 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 作者简历 | 第98-99页 |
