重组梅花鹿胸腺素β4原核表达载体的构建及活性研究
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩写词表 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-16页 |
| 1 胸腺素β_4研究进展 | 第12-14页 |
| ·化学结构 | 第12页 |
| ·生物学分布 | 第12-13页 |
| ·药理作用 | 第13-14页 |
| ·临床研究进展 | 第14页 |
| 2 多肽的纯化研究 | 第14-15页 |
| 3 本研究的内容及意义 | 第15-16页 |
| 实验研究 | 第16-46页 |
| 1 材料与仪器 | 第16-21页 |
| ·材料 | 第16页 |
| ·试剂与配制 | 第16-20页 |
| ·仪器 | 第20-21页 |
| 2 技术路线 | 第21-22页 |
| 3 实验方法 | 第22-34页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·提取鹿茸总RNA | 第22-23页 |
| ·Tβ_4基因的RT-PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| ·目的基因的PCR产物回收 | 第24-25页 |
| ·TA克隆 | 第25页 |
| ·制备E.coli DH5α感受态细胞 | 第25页 |
| ·pMD~(TM)18-T-Tβ_4的转化 | 第25-26页 |
| ·EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切鉴定 | 第26页 |
| ·质粒pMD~(TM)18-T-Tβ_4的测序 | 第26-27页 |
| ·表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·IPTG诱导表达 | 第28-29页 |
| ·粗蛋白液制备 | 第29-30页 |
| ·蛋白纯化 | 第30-32页 |
| ·蛋白含量测定——Bradford法 | 第32页 |
| ·活性检测——MTT法 | 第32-34页 |
| 4 实验结果 | 第34-46页 |
| ·鹿茸总RNA的提取 | 第34页 |
| ·Tβ_4基因的扩增 | 第34-35页 |
| ·TA克隆及测序鉴定结果 | 第35页 |
| ·Tβ_4测序结果 | 第35-37页 |
| ·表达载体构建及测序结果 | 第37-38页 |
| ·Tβ_4蛋白表达 | 第38-40页 |
| ·Tβ_4蛋白的纯化 | 第40-42页 |
| ·蛋白含量测定 | 第42-43页 |
| ·Tβ_4蛋白细胞活性检测 | 第43-46页 |
| 讨论 | 第46-49页 |
| 1 RNA的提取 | 第46页 |
| 2 表达载体的成功构建 | 第46页 |
| 3 蛋白表达及纯化 | 第46-47页 |
| 4 细胞活性研究 | 第47-49页 |
| 结语 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 已发表文章 | 第58页 |
