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Tol2转座子介导的斑马鱼诱变及nup107突变体研究

摘要第1-4页
Abstract第4-9页
主要符号对照表第9-10页
第1章 引言第10-42页
   ·斑马鱼突变体的筛选第11-19页
     ·物理诱变第11-12页
     ·化学诱变第12-18页
     ·插入突变第18-19页
   ·Tol2 转座子的研究第19-23页
     ·Tol2 转座子第19-20页
     ·斑马鱼中 Tol2 转座子介导的捕获技术及筛选第20-23页
   ·斑马鱼咽弓软骨的发育第23-27页
     ·斑马鱼咽弓软骨结构及发育第23-25页
     ·咽弓软骨发育受内部信号调节第25页
     ·咽弓软骨发育受外部信号调节第25-27页
     ·咽弓软骨发育异常相关的出生缺陷第27页
   ·斑马鱼肠道的发育第27-28页
   ·核孔复合体的研究第28-36页
     ·核孔复合体的结构第28-30页
     ·核孔复合体的装配第30-31页
     ·核孔复合体功能及研究进展第31-35页
     ·核孔蛋白 Nup107 研究进展第35-36页
   ·DNA 损伤检验点第36-41页
     ·细胞周期检验点激活第37-38页
     ·DNA 修复通路激活第38页
     ·细胞凋亡第38-41页
   ·本课题的目的和内容第41-42页
第2章 材料和方法第42-62页
   ·斑马鱼品系及转基因鱼第42页
   ·Tol2 转座子介导的基因捕获及突变体筛选第42-44页
     ·Tol2 转座子基因捕获载体结构第42-43页
     ·Tol2 转座酶合成第43页
     ·显微注射第43页
     ·转基因鱼和突变体筛选第43-44页
   ·Tol2 转座子插入位点分析第44-51页
     ·基因组 DNA 提取第44页
     ·TAIL-PCR第44-46页
     ·LM-PCR第46-49页
     ·5’RACE第49-50页
     ·RT-PCR第50-51页
     ·胚胎基因型分析第51页
   ·整胚原位杂交第51-53页
     ·原位杂交探针载体构建第51页
     ·探针合成第51页
     ·整胚原位杂交第51-53页
   ·荧光实时定量 PCR第53-54页
   ·Morpholino 合成第54-55页
   ·冷冻切片第55-56页
   ·石蜡切片及苏木素/伊红染色(H&E)染色第56页
   ·免疫荧光染色(整胚/切片)第56-57页
   ·Aclian Blue 染色第57页
   ·吖啶橙染色第57-58页
   ·Tunel 检测第58页
   ·BrdU 染色第58-59页
   ·流式细胞术分析胚胎细胞周期第59页
   ·Poly[A]+ RNA 出核实验第59-60页
   ·透射电镜第60页
   ·免疫印迹第60-62页
第3章 Tol2 转座子介导的插入诱变及突变体筛选第62-70页
   ·大规模注射及饲养第62页
   ·转基因鱼筛选第62-64页
     ·仅母源表达 GFP 的转基因鱼家系第62-63页
     ·母源和合子期均表达 GFP 的转基因家系第63页
     ·只在合子期表达 GFP 的转基因家系第63-64页
   ·突变体筛选第64-68页
     ·TSG016 突变体第65-66页
     ·TSG055 突变体第66页
     ·TSG182 突变体第66-67页
     ·TSG190 突变体第67-68页
   ·总结与讨论第68-70页
第4章 斑马鱼 nup107 突变体的研究第70-95页
   ·nup107~(tsu068Gt)转基因胚胎荧光表达谱第70页
   ·nup107~(tsu068Gt)t转基因家系中 nup107 被捕获第70-73页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体表型分析第73-75页
   ·咽弓、肠道和眼等组织发育需要 nup107 的表达第75-76页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中软骨细胞分化受影响第76-79页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中出现过量细胞凋亡第79-81页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中细胞过量凋亡部分依赖 p53第81-83页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中细胞增殖及周期正常第83-84页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中纺锤体装配和染色体分离正常第84-85页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中 FG-repeat 核孔蛋白定位受到破坏第85-86页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中核孔数量减少第86-87页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中 mRNAs 出核受到抑制第87-89页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体中 DNA 损伤应答 ATM-Chk2-p53 通路被激活第89-90页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体对 DNA 复制抑制剂敏感第90-91页
   ·总结与讨论第91-95页
第5章 结论第95-96页
参考文献第96-111页
致谢第111-113页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第113页

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