| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| ·转基因作物研究进展 | 第13-18页 |
| ·转基因作物的发展概况 | 第13页 |
| ·我国转基因作物发展概况 | 第13-14页 |
| ·转基因生物的安全性问题 | 第14-15页 |
| ·转基因生物及其产品的标识管理制度 | 第15-16页 |
| ·抗除草剂转基因作物的研究进展 | 第16-18页 |
| ·转基因植物及其产品检测方法的研究进展 | 第18-24页 |
| ·核酸水平上的检测 | 第19-22页 |
| ·蛋白质水平上的检测 | 第22-24页 |
| ·本课题的研究内容和技术路线 | 第24-26页 |
| ·研究内容 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-48页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·供试材料 | 第26页 |
| ·所需试剂及主要溶液配制 | 第26-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·重组 PAT 蛋白的制备 | 第29-37页 |
| ·bar 基因的扩增、测序和重组表达载体的构建 | 第29-34页 |
| ·重组表达载体的诱导表达与条件优化 | 第34-35页 |
| ·重组 PAT 蛋白的纯化和含量测定 | 第35-36页 |
| ·重组 PAT 蛋白的 Western-blot 鉴定 | 第36-37页 |
| ·抗 PAT 蛋白单克隆抗体的制备 | 第37-43页 |
| ·BABL∕c 小鼠的免疫程序 | 第37页 |
| ·间接 ELISA 检测小鼠血清抗体效价 | 第37-38页 |
| ·细胞融合 | 第38-39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第39-40页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体抗原识别位点的鉴定 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第42页 |
| ·单克隆抗体的 Western-blot 鉴定 | 第42页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性检测 | 第42-43页 |
| ·腹水的制备 | 第43页 |
| ·双抗体夹心 ELISA 检测方法的建立 | 第43-46页 |
| ·腹水的纯化与效价测定 | 第43页 |
| ·HRP 标记单克隆抗体 | 第43-44页 |
| ·配对抗体的选择 | 第44页 |
| ·包被抗体和酶标抗体最佳配对浓度确定 | 第44-45页 |
| ·抗原的孵育时间和酶标抗体反应时间的确定 | 第45页 |
| ·封闭液的优化 | 第45页 |
| ·临界值的确定和重复性检验 | 第45-46页 |
| ·双抗体夹心 ELISA 方法和 PCR 方法对样品的检测 | 第46-48页 |
| ·待检样品的处理 | 第46页 |
| ·夹心 ELISA 方法的检测 | 第46页 |
| ·PCR 方法的检测 | 第46-47页 |
| ·两种检测方法的结果比较 | 第47-48页 |
| 3 结果和分析 | 第48-60页 |
| ·重组 PAT 蛋白的制备 | 第48-51页 |
| ·bar 基因的扩增与测序结果 | 第48-49页 |
| ·重组原核表达质粒 pET-28a-bar 的构建 | 第49页 |
| ·重组表达载体的诱导表达与条件优化 | 第49-50页 |
| ·重组 PAT 蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·重组 PAT 蛋白的 Western-blot 鉴定 | 第51页 |
| ·抗 PAT 蛋白单克隆抗体的制备 | 第51-54页 |
| ·BABL∕c 小鼠的血清效价检测结果 | 第51页 |
| ·细胞融合结果 | 第51-52页 |
| ·杂交瘤细胞的亚隆化结果 | 第52页 |
| ·单克隆抗体抗原识别位点的鉴定 | 第52页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体 Western-blot 鉴定 | 第53页 |
| ·杂交瘤细胞系分泌稳定性检测结果 | 第53-54页 |
| ·双抗体夹心 ELISA 方法的建立 | 第54-57页 |
| ·单克隆抗体的纯化和效价测定 | 第54页 |
| ·包被抗体和酶标抗体最佳配对的选择 | 第54-55页 |
| ·最佳配对浓度确定 | 第55页 |
| ·抗原孵育时间和酶标单抗孵育时间的选择 | 第55页 |
| ·封闭液的选择 | 第55-56页 |
| ·重复性、灵敏度和检测临界值的确定 | 第56-57页 |
| ·双抗体夹心 ELISA 方法和 PCR 方法对样品的检测 | 第57-60页 |
| ·PCR 方法的检测结果 | 第57-58页 |
| ·ELISA 方法的检测结果和与 PCR 检测方法的比较 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| ·制备标准重组 PAT 蛋白的必要性 | 第60页 |
| ·单克隆抗体制备过程中需要注意的问题 | 第60-61页 |
| ·bar 基因和 pat 基因的比较 | 第61页 |
| ·应用单克隆抗体建立的双抗体夹心 ELISA 方法的优势 | 第61-62页 |
| ·ELISA 检测方法的评价 | 第62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第74页 |
