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5-氨基酮戊酸脱水酶基因的克隆表达及与大蒜绿变关系的研究

符号和缩略词说明第1-8页
摘要第8-9页
Abstract第9-11页
1 引言第11-24页
   ·大蒜概述第11-12页
     ·大蒜的化学成分第11-12页
     ·大蒜的重要生理功能第12页
   ·大蒜的生理休眠第12-13页
   ·大蒜产业的现状及前景第13-14页
   ·国内外有关大蒜绿变的研究第14-16页
     ·大蒜绿色素的性质第14-15页
     ·烷基-吡咯基氨基酸与大蒜绿变第15页
     ·呼吸代谢与大蒜绿变第15页
     ·大蒜绿色素的结构解析第15-16页
     ·三羧酸循环与大蒜绿变第16页
   ·卟啉合成共有途径酶类研究进展第16-22页
     ·胆色素原脱氨酶(Porphobilinogen deaminase,PBGD)第18页
     ·尿卟啉原 III 合酶(Uroporporphyrinogn III synthase,UROS)第18页
     ·5-氨基酮戊酸脱水酶(5-aminolevulinate dehydratase,ALAD)第18-22页
   ·本课题研究目的和意义第22-24页
     ·研究目的第22-23页
     ·研究意义第23-24页
2 材料与方法第24-36页
   ·试验材料第24-26页
     ·植物材料第24页
     ·菌株与质粒第24页
     ·试剂盒和酶第24页
     ·生化试剂及实验仪器第24页
     ·培养基第24-25页
     ·PCR 引物第25-26页
   ·试验方法第26-36页
     ·总 RNA 的提取第26页
     ·总 RNA 的检测第26-27页
     ·反转录 cDNA 模板第27页
     ·通过 3’RACE 获得 3’端序列第27-28页
     ·通过 5’RACE 获得 5’端序列第28-30页
     ·琼脂糖凝胶电泳第30-31页
     ·目的片段的回收第31页
     ·连接反应第31页
     ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备和转化第31-33页
     ·碱法提质粒第33-34页
     ·质粒 DNA 酶切验证第34页
     ·cDNA 片段的测序及序列分析第34页
     ·实时荧光定量 PCR第34-35页
     ·大蒜绿变强度定义及测定方法第35页
     ·5-氨基酮戊酸脱水酶的测定方法第35页
     ·胆色素原的测定方法第35-36页
3 结果与分析第36-49页
   ·大蒜总 RNA 的提取第36页
   ·大蒜 5-氨基酮戊酸脱水酶基因的克隆第36-38页
     ·大蒜 5-氨基酮戊酸脱水酶基因中间片段的克隆第36-37页
     ·5-氨基酮戊酸脱水酶基因 3’端的克隆第37-38页
     ·5-氨基酮戊酸脱水酶基因 5’端的克隆第38页
   ·ALAD 基因序列分析第38-41页
   ·5-氨基酮戊酸脱水酶活性变化第41-43页
     ·不同贮藏温度下邳州白蒜和苍山蒲棵大蒜 ALAD 活性变化第41-42页
     ·室温下邳州白蒜和苍山蒲棵大蒜 ALAD 活性变化第42-43页
   ·胆色素原含量的变化第43-45页
     ·不同贮藏温度下邳州白蒜和苍山蒲棵大蒜 PBG 含量变化第43-44页
     ·室温下邳州白蒜和苍山蒲棵大蒜 PBG 含量变化第44-45页
   ·5-氨基酮戊酸脱水酶基因的表达第45-47页
     ·不同贮藏温度下邳州白蒜和苍山蒲棵大蒜 ALAD 基因表达第45-46页
     ·室温下邳州白蒜和苍山蒲棵大蒜 ALAD 基因表达第46-47页
   ·大蒜绿变强度变化第47-49页
     ·不同贮藏温度下邳州白蒜和苍山蒲棵大蒜绿变强度变化第47-48页
     ·室温下邳州白蒜和苍山蒲棵大蒜绿变强度变化第48-49页
4 讨论第49-52页
   ·关于大蒜 RNA 的提取第49页
   ·关于 5’race第49-50页
   ·关于 ALAD 基因表达与酶活性第50-51页
   ·进一步研究方向第51-52页
5 结论第52-53页
参考文献第53-61页
致谢第61页

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