| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| ·蛋白质的翻译后修饰研究进展 | 第12-13页 |
| ·蛋白质的泛素化研究进展 | 第13-14页 |
| ·蛋白质的泛素化过程 | 第13页 |
| ·蛋白质的泛素化的生物学功能 | 第13-14页 |
| ·类泛素修饰物 Sumo | 第14-15页 |
| ·Sumo 家族概述 | 第14页 |
| ·SUMO 蛋白的结构 | 第14页 |
| ·SUMO 第一类家族的研究进展 | 第14-15页 |
| ·SUMO 化途径的研究进展 | 第15-17页 |
| ·SUMO 化修饰的生化反应过程 | 第15页 |
| ·SUMO 化的生物学功能 | 第15-17页 |
| ·Oct4 的 SUMO-1 化修饰研究 | 第17-18页 |
| ·本研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 SUMO 化修饰系统载体的构建 | 第20-34页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-30页 |
| ·引物的设计及合成 | 第22页 |
| ·Trizol 裂解法提取 RNA | 第22-23页 |
| ·RNA 反转录成 cDNA | 第23-24页 |
| ·由 cDNA 模板扩增目的片段 | 第24-25页 |
| ·胶回收 Ubc9、Sumo1、Oct4、Sae1 和 Sae2 目的基因片段 PCR 扩增产物14 | 第25页 |
| ·目的片段 Oct4 的 118 位赖氨酸突变为精氨酸 | 第25-26页 |
| ·酶切目的片段及载体 | 第26-27页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第27-28页 |
| ·Inoue 法制备超级感受态细胞（BL21、DH5α） | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·抽提重组质粒 pACYC-Ubc9、pCDF- Sae2、pGEX-Oct4/Oct4K118R | 第28页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 pACYC-Ubc9、pCDF- Sae2、pGEX-Oct4 和 | 第28-29页 |
| ·载体 pACYC-Ubc9、目的片段 Sumo1 和载体 pCDF- Sae2、Sae1 片段的双酶切 | 第29页 |
| ·重组质粒 pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF- Sae2-Sae1 的构建 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-33页 |
| ·载体 pGEX-Oct4/Oct4K118R、pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF- Sae2-Sae1构建原理 | 第30页 |
| ·双表达载体 pACYC-Ubc9-Sumo1 的构建 | 第30-31页 |
| ·双表达载体 pCDF- Sae1-Sae2 的构建 | 第31-32页 |
| ·Oct4 的突变体 Oct4K118R的鉴定 | 第32页 |
| ·表达载体 pGEX-Oct4 和 pGEX-Oct4K118R的构建 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 SUMO 化修饰系统各载体蛋白表达检测 | 第34-40页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶的配置及电泳（SDS-PAGE） | 第35-36页 |
| ·目的蛋白的 Western Blot 的检测 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-39页 |
| ·pACYC-Ubc9-Sumo1 的载体蛋白表达 | 第37页 |
| ·pCDF- Sae1-Sae2 的载体蛋白表达 | 第37-38页 |
| ·载体 pGEX-Oct4 和 pGEX-Oct4K118R蛋白的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 SUMO 化修饰系统的构建及底物 Oct4 的 Sumo 化修饰 | 第40-46页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·载体 pACYC-Ubc9-Sumo1 、 pCDF-Sae2-Sae1 、 PGEX-Oct4K118R、PGEX-Oct4、BL21 感受态细胞 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-44页 |
| ·Sumo 化修饰系统的构建-pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1 共转 BL2130 | 第42页 |
| ·底物 Oct4 的 Sumo 化修饰 | 第42-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-45页 |
| ·pGEX-Oct4/pGEX-Oct4K118R、pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1 三质粒共转系统的 PCR 检测 | 第44页 |
| ·Western blot 检测 Oct4 的 Sumo 化修饰 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 Sumo 化修饰系统的遗传稳定性检测 | 第46-48页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-47页 |
| ·pGEX-Oct4、pACYC-Ubc9-Sumo1 和 pCDF-Sae2-Sae1 质粒共表达菌株的稳定性检测 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47页 |
| ·pGEX-Oct4/pGEX-Oct4K118R、pACYC-Ubc9-Sumo1 和 pCDF-Sae2-Sae1 三质粒共表达菌株的稳定性检测 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第六章 小结与讨论 | 第48-50页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
