| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-18页 |
| 第一部分 | 第18-38页 |
| 1. 材料和方法 | 第19-24页 |
| ·主要液体配制方法 | 第20-21页 |
| ·脂肪干细胞的分离和培养 | 第21页 |
| ·细胞形态学观察 | 第21-22页 |
| ·CCK8法检测细胞体外增殖能力 | 第22页 |
| ·细胞周期的测定 | 第22页 |
| ·流式细胞术检测ASDCs表面标记 | 第22页 |
| ·ADSCs成脂诱导 | 第22-23页 |
| ·ADSCs成骨诱导 | 第23-24页 |
| 2. 结果 | 第24-27页 |
| ·细胞形态学观察 | 第24-25页 |
| ·细胞增殖能力检测 | 第25页 |
| ·细胞周期 | 第25页 |
| ·细胞表型特征 | 第25-26页 |
| ·ASDCs的成脂诱导 | 第26页 |
| ·ASDCs的成骨 | 第26-27页 |
| 3. 讨论 | 第27-33页 |
| ·ADSCs的分离与培养 | 第28-29页 |
| ·ADSCs的增殖和凋亡 | 第29-31页 |
| ·ADSCs的表型特征 | 第31-32页 |
| ·ADSCs的多向诱导分化 | 第32-33页 |
| 本部分结论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-38页 |
| 第二部分 | 第38-54页 |
| 1. 材料与方法 | 第39-44页 |
| ·主要材料 | 第39页 |
| ·质粒的扩增与提取 | 第39-41页 |
| ·PEI/DNA纳米粒凝胶阻滞分析 | 第41页 |
| ·ADSCs培养与鉴定 | 第41-42页 |
| ·PEI细胞毒性试验 | 第42页 |
| ·PEI及PEI/DNA复合物的微观形态和粒径特征的观察 | 第42-43页 |
| ·PEI介导的基因转染效率的检测 | 第43页 |
| ·绿色荧光蛋白表达的检测和转染效率的统计 | 第43-44页 |
| 2. 结果 | 第44-47页 |
| ·凝胶阻滞分析 | 第44页 |
| ·PEI及PEI/DNA复合物的电镜观察和粒径检测结果 | 第44-45页 |
| ·绿色荧光蛋白的表达和转染效率的检测 | 第45页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第45-46页 |
| ·细胞毒性检测结果 | 第46-47页 |
| 3. 讨论 | 第47-50页 |
| 本部分小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 第三部分 | 第54-79页 |
| 1. 材料和方法 | 第55-63页 |
| ·主要材料 | 第55页 |
| ·真核表达质粒pEGFP-N1-BMP-2的构建 | 第55-59页 |
| ·外源目的基因的普通PCR扩增 | 第55-56页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第56页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第56-57页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第57页 |
| ·外源目的DNA片段与目的载体的连接反应 | 第57页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)及连接产物的转化 | 第57页 |
| ·质粒的小量制备 | 第57页 |
| ·质粒的大提制备 | 第57页 |
| ·质粒DNA的定量 | 第57-58页 |
| ·重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第58页 |
| ·RNA的提取 | 第58页 |
| ·逆转录PCR | 第58页 |
| ·相对定量PCR | 第58-59页 |
| ·ADSCs分离培养与鉴定 | 第59-60页 |
| ·BMP-2基因转染兔ADSCs | 第60-61页 |
| ·转染后细胞增殖情况检测 | 第61页 |
| ·转染后BMP-2表达的检测 | 第61-62页 |
| ·转染后ADSCs成骨分化的测定 | 第62-63页 |
| 2. 结果 | 第63-71页 |
| ·转染后细胞形态及增殖情况 | 第63-64页 |
| ·细胞表型特征 | 第64-65页 |
| ·真核表达质粒pEGFP-N1-BMP-2的构建结果 | 第65-67页 |
| ·转染后BMP-2基因表达的检测 | 第67-68页 |
| ·ELISA检测转染后各组细胞BMP-2蛋白的分泌量 | 第68-69页 |
| ·转染后ADSCs成骨分化的测定结果 | 第69-71页 |
| 3. 讨论 | 第71-74页 |
| 部分小结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 综述 | 第79-106页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 主要符号和缩略语说明 | 第106-107页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 统计审核证明 | 第110页 |
