| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 常用英文缩写词汇 | 第10-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一部分 引言 | 第16-24页 |
| 1. 鸭瘟病毒研究概况 | 第16-20页 |
| ·鸭瘟病毒发现历史及名称 | 第16页 |
| ·鸭瘟病毒的分类地位 | 第16-17页 |
| ·鸭瘟病毒生物学特性 | 第17-18页 |
| ·鸭瘟病毒分子生物学研究现状 | 第18-19页 |
| ·鸭瘟病毒gC、gE基因研究现状 | 第19-20页 |
| 2. 鸭瘟病毒gC基因在基因疫苗研究中的应用 | 第20-21页 |
| 3. 定量PCR在检测基因疫苗体内分布规律研究中的优越性 | 第21-22页 |
| 4. gC、gE基因缺失株在鸭瘟病毒研究中的意义 | 第22-24页 |
| 第二部分 实验研究 | 第24-99页 |
| 1. 实验目的和意义 | 第24页 |
| 2. 实验材料 | 第24-30页 |
| ·病毒毒株、细菌菌株 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·质粒和载体 | 第24页 |
| ·分子生物学试剂和耗材 | 第24-25页 |
| ·常用实验试剂及配制 | 第25-28页 |
| ·常用实验设备 | 第28-30页 |
| 3. 实验方法 | 第30-68页 |
| ·鸭瘟病毒gC基因真核表达质粒的构建与鉴定 | 第30-37页 |
| ·鸭瘟病毒gC基因片段的获取 | 第30-32页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1(+)的线性化 | 第32页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·线性化pcDNA3.1(+)和DPV gC基因片段的连接 | 第33页 |
| ·重组质粒的转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的抽提、酶切鉴定与保存 | 第33-34页 |
| ·间接免疫荧光法检测pcDNA-DPV-gC在真核细胞中的表达 | 第34-37页 |
| ·定量PCR检测鸭瘟病毒gC基因疫苗在鸭体内分布规律 | 第37-44页 |
| ·真核表达质粒pcDNA-DPV-gC的制备 | 第37-40页 |
| ·基因枪“子弹”的制备及初步使用 | 第40-42页 |
| ·壳聚糖/pcDNA-DPV-gC复合物的制备 | 第42页 |
| ·脂质体/pcDNA-DPV-gC复合物制备 | 第42-43页 |
| ·试验分组与免疫 | 第43页 |
| ·样品采集 | 第43页 |
| ·模板DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·定量PCR检测鸭瘟病毒gC基因疫苗在鸭体内的动态分布规律 | 第44页 |
| ·鸭瘟病毒gC基因缺失株的构建与鉴定 | 第44-58页 |
| ·鸭瘟病毒基因组核酸的制备 | 第44-46页 |
| ·转移载体左右臂的构建和鉴定 | 第46-49页 |
| ·重组质粒pUC-△gC的构建 | 第49-51页 |
| ·EGFP表达盒的获取 | 第51-55页 |
| ·含EGFP基因表达盒转移质粒载体的构建 | 第55-56页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gC-EGFP的构建 | 第56-58页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gC-EGFP的鉴定 | 第58页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gC-EGFP的生物学特性研究 | 第58-61页 |
| ·空斑试验 | 第58-59页 |
| ·一步生长曲线 | 第59页 |
| ·形态学观察 | 第59-60页 |
| ·动物实验 | 第60-61页 |
| ·鸭瘟病毒gE基因缺失株的构建与鉴定 | 第61-66页 |
| ·转移载体左右臂的构建和鉴定 | 第61-63页 |
| ·重组质粒pUC-△gE-EGFP的构建 | 第63-65页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的构建与鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的生物学特性研究 | 第66-68页 |
| ·空斑试验 | 第66页 |
| ·一步生长曲线 | 第66页 |
| ·形态学观察 | 第66页 |
| ·动物实验 | 第66-68页 |
| 4. 实验结果 | 第68-90页 |
| ·真核表达质粒pcDNA-DPV-gC的构建与鉴定 | 第68-69页 |
| ·真核表达质粒pcDNA-DPV-gC的构建结果 | 第68-69页 |
| ·间接免疫荧光鉴定pcDNA-DPV-gC在COS-7细胞中的表达 | 第69页 |
| ·鸭瘟病毒gC基因疫苗在鸭体内分布规律 | 第69-73页 |
| ·高密度发酵影响因素 | 第69-70页 |
| ·鸭瘟病毒gC基因疫苗的鉴定 | 第70页 |
| ·免疫接种鸭临床表现及组织DNA抽提情况 | 第70-71页 |
| ·定量PCR检测鸭瘟病毒gC基因疫苗在接种鸭体内分布情况 | 第71-73页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP的构建与鉴定 | 第73-76页 |
| ·转移载体pUC-△gC-EGFP的构建 | 第73页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP的构建与生长特性初步观察 | 第73-75页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP的鉴定 | 第75-76页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP的生物学特性初步观察 | 第76-81页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP的空斑试验结果 | 第76页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP的一步生长曲线 | 第76-78页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP的形态观察 | 第78-79页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP对鸭的致病性 | 第79-80页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP引起鸭中和抗体的变化 | 第80页 |
| ·鸭瘟重组病毒DPV-△gC-EGFP对鸭的保护作用 | 第80-81页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的构建与鉴定 | 第81-86页 |
| ·转移载体pUC-△gE-EGFP的构建 | 第81-83页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的构建与生长特性初步观察 | 第83-84页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的鉴定结果 | 第84-86页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的生物学特性初步观察 | 第86-90页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的空斑试验结果 | 第86页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的一步生长曲线 | 第86-87页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP的形态观察 | 第87页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP对鸭的致病性 | 第87-88页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP引起鸭的中和抗体变化 | 第88页 |
| ·重组鸭瘟病毒DPV-△gE-EGFP对鸭的保护作用 | 第88-90页 |
| 5. 讨论 | 第90-99页 |
| ·真核表达质粒pcDNA-DPV-gC的构建与鉴定 | 第90-92页 |
| ·真核表达质粒pcDNA-DPV-gC的构建 | 第90-91页 |
| ·真核表达质粒的鉴定 | 第91-92页 |
| ·鸭瘟病毒gC基因疫苗在雏鸭体内分布规律 | 第92-94页 |
| ·基因组核酸样品中影响定量PCR反应的因素 | 第92页 |
| ·.免疫佐剂对鸭瘟病毒gC基因疫苗在雏鸭体内分布的影响 | 第92页 |
| ·免疫途径对鸭瘟病毒gC基因疫苗在雏鸭体内分布的影响 | 第92-94页 |
| ·免疫剂量对鸭瘟病毒gC基因疫苗在雏鸭体内分布的影响 | 第94页 |
| ·鸭瘟病毒基因缺失株构建方法的选择 | 第94-95页 |
| ·不同空斑检测方法在鸭瘟病毒研究方面的应用 | 第95-96页 |
| ·鸭瘟病毒gC缺失重组株生物学特性初步研究结果 | 第96-97页 |
| ·鸭瘟病毒gE缺失重组株生物学特性初步研究结果 | 第97-99页 |
| 第三部分 总结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-118页 |
| 附录 | 第118-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 攻读学位期间发表学术论文情况 | 第124页 |
