| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| ·P24蛋白简介 | 第11-15页 |
| ·P24蛋白的生物学性质 | 第11-12页 |
| ·P24蛋白的免疫学性质 | 第12页 |
| ·P24蛋白的检测意义 | 第12-13页 |
| ·P24蛋白检测的方法和原理 | 第13-14页 |
| ·P24蛋白检测的应用 | 第14-15页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第15-17页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第15-16页 |
| ·单克隆抗体的应用 | 第16-17页 |
| ·快速诊断研究 | 第17-20页 |
| ·快速诊断简介 | 第17页 |
| ·胶体金免疫层析在快速诊断中的应用 | 第17-20页 |
| ·国内外HIV检测试剂盒的发展现状 | 第20-21页 |
| ·HIV检测试剂的分代 | 第20页 |
| ·我国HIV检测试剂发展现状 | 第20-21页 |
| ·本论文研究背景、主要内容及意义 | 第21-24页 |
| ·研究背景及意义 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 HIV-1 p24蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第24-41页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料与仪器 | 第24-27页 |
| ·基因,菌种,质粒,引物及载体 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·常用溶液及培养基的配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-36页 |
| ·P24基因的获得 | 第27-30页 |
| ·载体质粒的获得 | 第30页 |
| ·PCR扩增产物与pET28a载体分别双酶切并进行连接反应 | 第30-31页 |
| ·E.coli DH5α和E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·重组质粒pET28a-p24的鉴定 | 第32-33页 |
| ·转化及阳性克隆的获得 | 第33页 |
| ·小量表达及表达条件优化 | 第33-35页 |
| ·大量表达及亲和层析纯化 | 第35-36页 |
| ·纯化后蛋白的透析脱盐 | 第36页 |
| ·重组p24蛋白的鉴定 | 第36页 |
| ·实验结果 | 第36-40页 |
| ·P24基因扩增结果 | 第36-37页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pET28a-p24双酶切鉴定以及测序分析 | 第37-38页 |
| ·P24蛋白小量诱导表达 | 第38页 |
| ·亲和层析纯化结果 | 第38-40页 |
| ·间接ELISA鉴定p24蛋白 | 第40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 P24特异性单克隆抗体的制备及鉴定 | 第41-56页 |
| ·前言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-45页 |
| ·实验动物与细胞株 | 第41页 |
| ·主要仪器设备、耗材 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·培养基与常用溶液 | 第43-45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·P24单克隆抗体的制备及纯化 | 第45-50页 |
| ·单克隆抗体的分析鉴定 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-55页 |
| ·小鼠血清的效价分析 | 第51-52页 |
| ·细胞融合及阳性克隆的筛选 | 第52-53页 |
| ·三十三株单克隆抗体亚类的鉴定 | 第53页 |
| ·三十三株杂交瘤细胞腹水及纯化后IgG型抗体效价检测 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE分析纯化后的抗体 | 第54-55页 |
| ·抗体识别p24蛋白的特异性 | 第55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 胶体金免疫层析平台检测p24蛋白方法的建立 | 第56-72页 |
| ·前言 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56-58页 |
| ·检测样品 | 第56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56-57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·常用溶液 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-65页 |
| ·ELISA平台筛选适用于双抗体夹心法的单克隆抗体对 | 第58-59页 |
| ·喷膜 | 第59页 |
| ·胶体金标记单克隆抗体 | 第59-60页 |
| ·胶体金免疫层析检测条的组装 | 第60页 |
| ·胶体金免疫层析平台筛选抗体配对组合 | 第60-61页 |
| ·胶体金免疫层析平台检测重组p24蛋白 | 第61页 |
| ·HRP标记单克隆抗体 | 第61页 |
| ·HRP标记单克隆抗体ELISA双抗体夹心时工作浓度的确定 | 第61-62页 |
| ·胶体金免疫层析平台配对抗体在ELISA平台的灵敏度评价 | 第62页 |
| ·胶体金免疫层析平台常见交叉物测试 | 第62-64页 |
| ·添加阻断剂改善胶体金法检测p24抗原的特异性 | 第64页 |
| ·胶体金免疫层析法检测血清样品 | 第64-65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-70页 |
| ·ELISA平台筛选双抗体夹心法抗体对 | 第65-66页 |
| ·单克隆抗体在胶体金免疫层析平台的配对 | 第66页 |
| ·胶体金免疫层析法检测重组p24蛋白 | 第66-67页 |
| ·ELISA法评价在胶体金免疫层析平台配对的抗体组合 | 第67-69页 |
| ·胶体金免疫层析平台常见交叉物检测 | 第69页 |
| ·添加阻断剂对于胶体金免疫层析检测的影响 | 第69页 |
| ·胶体金免疫层析法检测HIV-1 p24国家参考品P系列以及L系列 | 第69-70页 |
| ·胶体金免疫层析法检测HIV阴性血清 | 第70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 结论和展望 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82页 |
