| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 1. 蛋白酶研究概况 | 第13-15页 |
| ·蛋白酶的分类 | 第13-15页 |
| ·蛋白酶的应用 | 第15页 |
| 2. M16家族蛋白酶简介 | 第15-17页 |
| 3. 极端嗜热菌T. thermophilus | 第17页 |
| ·极端嗜热菌T. thermophilus简介 | 第17页 |
| ·T. thermophilus HB8中的金属蛋白酶的TTHA1264和TTHA1265 | 第17页 |
| 4. 蛋白质晶体学简介 | 第17-21页 |
| ·常用蛋白质结晶方法 | 第18-19页 |
| ·影响蛋白质晶体生长的因素 | 第19-21页 |
| 第一章 极端嗜热菌蛋白水解酶TTHA1264和TTHA1265基因的克隆、体外表达、表达产物的纯化及蛋白酶功能的初步研究 | 第21-47页 |
| 摘要 | 第21-22页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·质粒及宿主菌 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·T.thermophilus HB8基因组DNA | 第22页 |
| ·酶和试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-30页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265基因编码蛋白质的序列分析 | 第23页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265基因原核重组共表达质粒的构建及表达蛋白的纯化 | 第23-25页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265基因原核重组共表达质粒(引入核糖体结合位点)的构建及表达蛋白的纯化 | 第25-27页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265基因原核重组表达质粒的分别构建及表达蛋白的纯化 | 第27-29页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265蛋白功能的初步研究 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-44页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265基因所编码蛋白的结构特征分析 | 第30页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265基因原核重组共表达质粒的构建及表达蛋白的纯化 | 第30-32页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265基因原核重组共表达质粒(引入适合在大肠杆菌中表达的核糖体结合位点)的构建及表达蛋白的纯化 | 第32-35页 |
| ·单独表达TTHA1264和TTHA1265基因的原核重组表达质粒的构建及表达蛋白的纯化 | 第35-41页 |
| ·TTHA1264和TTHA1265蛋白功能的初步研究 | 第41-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第二章 极端嗜热菌TTHA1264和TTHA1265复合体的制备及复合体晶体结构的解析 | 第47-67页 |
| 摘要 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·表达宿主菌 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47-48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-52页 |
| ·蛋白酶TTHA1264、TTHA1265复合体的制备与纯化 | 第48-49页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第49页 |
| ·TTHA1264、TTHA1265蛋白的大量纯化 | 第49-50页 |
| ·复合体蛋白和TTHA1265的结晶条件初筛及优化 | 第50-51页 |
| ·复合体蛋白和TTHA1265蛋白晶体衍射数据采集与结构解析 | 第51页 |
| ·TTHA1265硒代甲硫氨酸蛋白纯化结晶、数据收集及结构解析 | 第51页 |
| ·TTHA1265和TTHA1264复合体蛋白的结构解析 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-65页 |
| ·蛋白酶TTHA1264、TTHA1265复合物的鉴定与纯化 | 第52-53页 |
| ·TTHA1264、1265蛋白的大量纯化 | 第53-55页 |
| ·复合体TTHA(1264+1265)的分子筛纯化 | 第55-56页 |
| ·复合体蛋白和TTHA1265结晶条件的筛选与优化 | 第56-59页 |
| ·复合体蛋白和TTHA1265蛋白晶体的衍射、数据收集与处理 | 第59-60页 |
| ·TTHA1265硒代甲硫氨酸蛋白纯化结晶及晶体的X射线衍射 | 第60-63页 |
| ·TTHA1265以及TTHA1264、TTHA1265复合体结构的解析 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 全文总结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
