| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·家蚕基因组与功能基因组研究基础 | 第13-16页 |
| ·家蚕基因组研究背景简介 | 第13-14页 |
| ·家蚕功能基因组研究简介 | 第14-15页 |
| ·家蚕基因功能研究的主要技术方法简介 | 第15-16页 |
| ·家蚕遗传操作技术平台现状 | 第16-18页 |
| ·家蚕转基因技术体系 | 第16-17页 |
| ·基因打靶技术 | 第17-18页 |
| ·家蚕基因敲除的研究现状 | 第18页 |
| ·家蚕基因敲除与基因组编辑技术的迫切性 | 第18-19页 |
| ·TALEN介导的基因敲除与基因组编辑 | 第19-23页 |
| ·TALEN的发展历程 | 第19-20页 |
| ·TALEN的工作原理 | 第20-22页 |
| ·TALEN的应用 | 第22-23页 |
| ·长片段基因组删除与靶向基因组结构变异 | 第23-25页 |
| 第二章 引言 | 第25-27页 |
| ·研究背景及目的意义 | 第25页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第25-27页 |
| 第三章 TALEN的设计与组装 | 第27-39页 |
| ·材料与试剂 | 第27-29页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·主要试剂和配方 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-36页 |
| ·B3-TALEN敲除载体的设计与合成 | 第29-30页 |
| ·B3-TALEN敲除载体的构建与mRNA的制备 | 第30-36页 |
| ·实验结果与分析 | 第36-37页 |
| ·B3-TALEN的设计 | 第36页 |
| ·B3-TALEN敲除载体的组装和mRNA的合成 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 TALEN介导的家蚕基因BmBlos2的敲除 | 第39-47页 |
| ·材料及试剂 | 第39-41页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·主要的试剂和耗材 | 第40-41页 |
| ·实验所需的试剂配制 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·B3-TALEN mRNA的胚胎显微注射 | 第41-42页 |
| ·杂交和突变体的筛选 | 第42页 |
| ·突变体的测序 | 第42-44页 |
| ·家蚕基因组的提取 | 第42页 |
| ·模板基因组的制备 | 第42页 |
| ·模板基因组的PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·扩增片段的凝胶电泳检测 | 第43页 |
| ·扩增片段的测序反应 | 第43-44页 |
| ·实验结果与分析 | 第44-46页 |
| ·B3-TALEN mRNA注射个体及成功敲除个体的筛选 | 第44-45页 |
| ·突变个体序列的测定和分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 TALEN介导的长片段基因组删除 | 第47-53页 |
| ·实验材料与仪器 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47页 |
| ·实验结果与分析 | 第47-50页 |
| ·B2-TALEN的设计 | 第47页 |
| ·B2-TALEN表达载体的组装和mRNA的合成 | 第47-48页 |
| ·B2-TALEN mRNA注射个体及成功敲除个体的筛选 | 第48页 |
| ·突变个体序列的测定和分析 | 第48-49页 |
| ·TALEN介导的长片段删除 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第六章 TALEN介导的家蚕基因组结构变异 | 第53-57页 |
| ·实验材料与仪器 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53页 |
| ·实验结果与分析 | 第53-56页 |
| ·702-TALEN的设计 | 第53-54页 |
| ·702-TALEN活性的检测 | 第54-55页 |
| ·B2-TALEN和702-TALEN介导的染色体结构变异 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第七章 TALEN和ssODN介导的长片段基因组删除 | 第57-61页 |
| ·实验材料与仪器 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57页 |
| ·实验结果与分析 | 第57-59页 |
| ·ssODN的设计与合成 | 第57页 |
| ·ssODN与B2-TALEN共同注射及分析 | 第57-58页 |
| ·ssODN介导的突变的遗传和分子分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第八章 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-83页 |
| 一 缩略词表 | 第69-70页 |
| 二 氨基酸缩写一览表 | 第70-71页 |
| 三 引物和寡聚核苷酸、载体图 | 第71-72页 |
| 四 完整的TALENORF的核酸和氨基酸序列 | 第72-83页 |
| 硕士在读期间发表的文章及参加课题情况 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
