| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-39页 |
| ·层粘连蛋白受体相关研究 | 第14-17页 |
| ·层粘连蛋白和层粘连蛋白受体的概念 | 第14-15页 |
| ·层粘连蛋白受体的分类及特征 | 第15-16页 |
| ·67 kD 层粘连蛋白受体的功能 | 第16-17页 |
| ·67 kD 层粘连蛋白受体的研究现状 | 第17页 |
| ·67 kD 层粘连蛋白受体下游信号通路上的相关基因 | 第17-22页 |
| ·67 kD 层粘连蛋白受体介导的信号通路 | 第17-18页 |
| ·钙调蛋白 | 第18-20页 |
| ·钙调蛋白激酶及其调控的信号通路 | 第20-21页 |
| ·钙调蛋白调控的细胞内信号通路 | 第21-22页 |
| ·RNA 干扰和基因过表达技术在功能基因研究中的应用 | 第22-28页 |
| ·RNAi 的概念和作用机制 | 第22-24页 |
| ·RNAi 的几种方式 | 第24页 |
| ·RNAi 在功能基因验证中的应用 | 第24-25页 |
| ·基因过表达及其作用方式 | 第25-26页 |
| ·基因过表达的应用 | 第26-27页 |
| ·海洋无脊椎动物原代细胞培养及其在功能基因验证中的应用 | 第27-28页 |
| ·海洋双壳贝类幼虫发育及其分子调控机制 | 第28-32页 |
| ·海洋双壳贝类的幼虫发育史 | 第29-30页 |
| ·贝类幼虫发育过程中关键事件的分子调控 | 第30-32页 |
| ·细胞凋亡 | 第32-37页 |
| ·细胞凋亡的特征 | 第33页 |
| ·细胞凋亡的信号通路 | 第33-36页 |
| ·凋亡相关基因 bcl-2 和 p53 | 第36-37页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第37-39页 |
| 第2章 67 kD 层粘连蛋白受体及其下游信号通路上的相关基因的克隆和序列分析 | 第39-57页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·实验材料与方法 | 第40-45页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| ·实验所用引物 | 第40页 |
| ·实验所用试剂配制 | 第40-41页 |
| ·实验所使用主要仪器和设备 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·总 RNA 的提取及反转录 cDNA 的合成 | 第41-42页 |
| ·MmeLR 基因的全长 cDNA 的克隆 | 第42-44页 |
| ·MmeCaM 和 MmeCaMKIV 基因的 cDNA 的克隆 | 第44页 |
| ·序列分析 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-55页 |
| ·文蛤层粘连蛋白受体（MmeLR）的 cDNA 序列分析和进化分析 | 第45-48页 |
| ·MmeLR cDNA 的序列分析 | 第45-46页 |
| ·MmeLR 的进化分析 | 第46-48页 |
| ·文蛤钙调蛋白（MmeCaM）的克隆和序列分析 | 第48-52页 |
| ·MmeCaM cDNA 的序列分析 | 第48页 |
| ·MmeCaM 的进化分析 | 第48-52页 |
| ·文蛤钙调蛋白激酶（MmeCaMKIV）的克隆和序列分析 | 第52-55页 |
| ·MmeCaMKIV cDNA 的序列分析 | 第52-53页 |
| ·MmeCaMKIV 的进化分析 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第3章 MmeLR 在文蛤细胞粘附和凋亡中的功能分析 | 第57-78页 |
| ·引言 | 第57-58页 |
| ·实验材料与方法 | 第58-66页 |
| ·实验材料 | 第58-62页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| ·实验所用引物 | 第58-59页 |
| ·实验所用试剂配制 | 第59-62页 |
| ·实验所使用主要仪器和设备 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-66页 |
| ·文蛤外套膜原代细胞培养方法 | 第62页 |
| ·层粘连蛋白的免疫荧光染色 | 第62页 |
| ·MmeLR 原核重组表达和多克隆抗体制备 | 第62-63页 |
| ·实时定量 PCR（realtime PCR） | 第63-64页 |
| ·Western blot assay | 第64页 |
| ·Far-western analysis | 第64-65页 |
| ·原代培养细胞 MmeLR 和 laminin 结合实验（binding assay） | 第65页 |
| ·数据统计 | 第65-66页 |
| ·实验结果 | 第66-74页 |
| ·MmeLR 原核重组表达和多克隆抗体制备 | 第66-67页 |
| ·MmeLR 与其配体层粘连蛋白的相互作用 | 第67-68页 |
| ·层粘连蛋白在文蛤外套膜组织的表达 | 第67页 |
| ·rMmeLR 与 laminin 间的相互作用 | 第67-68页 |
| ·MmeLR 在文蛤不同组织中的表达情况 | 第68-70页 |
| ·MmeLR 在不同培养条件下的文蛤外套膜原代细胞中的表达 | 第70-72页 |
| ·文蛤外套膜原代细胞培养 | 第70页 |
| ·不同培养条件下文蛤原代细胞 MmeLR 的表达 | 第70-72页 |
| ·MmeLR 对原代细胞凋亡情况的影响 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-78页 |
| 第4章 MmeLR 在文蛤幼虫发育过程中的功能分析 | 第78-94页 |
| ·引言 | 第78-79页 |
| ·实验材料与方法 | 第79-83页 |
| ·实验材料 | 第79-80页 |
| ·实验动物和样品收集 | 第79页 |
| ·实验所用引物 | 第79-80页 |
| ·实验所使用主要仪器和设备 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-83页 |
| ·MmeLR siRNA 干扰幼虫实验 | 第80-81页 |
| ·RNA 提取和 cDNA 合成 | 第81-82页 |
| ·Realtime PCR | 第82页 |
| ·数据统计 | 第82页 |
| ·Western blot assay | 第82-83页 |
| ·幼虫免疫荧光实验 | 第83页 |
| ·实验结果 | 第83-91页 |
| ·MmeLR 在文蛤幼虫不同发育阶段的表达 | 第83-85页 |
| ·MmeLR 在文蛤幼虫不同发育阶段的蛋白表达定位 | 第85页 |
| ·MmeLR siRNA 干扰影响文蛤胚胎发育 | 第85-87页 |
| ·MmeLR siRNA 干扰影响文蛤幼虫组织发生分化 | 第87-88页 |
| ·MmeLR siRNA 干扰影响文蛤幼虫的生长 | 第88-89页 |
| ·MmeLR 沉默对幼虫凋亡情况的影响 | 第89-91页 |
| ·讨论 | 第91-94页 |
| 第5章 MmeLR 调控通路下游分子钙调蛋白对文蛤幼虫发育的影响 | 第94-106页 |
| ·引言 | 第94-95页 |
| ·实验材料与方法 | 第95-98页 |
| ·实验材料 | 第95-96页 |
| ·实验动物和样品收集 | 第95页 |
| ·实验所用引物 | 第95-96页 |
| ·实验所使用主要仪器和设备 | 第96页 |
| ·实验方法 | 第96-98页 |
| ·钙调蛋白抑制剂（TFP）处理幼虫实验 | 第96-97页 |
| ·RNA 提取和 cDNA 合成 | 第97页 |
| ·Realtime PCR | 第97-98页 |
| ·数据统计 | 第98页 |
| ·实验结果 | 第98-103页 |
| ·MmeCaM 在文蛤幼虫不同发育阶段的表达情况 | 第98-99页 |
| ·MmeCaM 抑制剂 TFP 对文蛤胚胎发育的影响 | 第99页 |
| ·MmeCaM 抑制剂 TFP 对文蛤幼虫壳生成的影响 | 第99-100页 |
| ·MmeCaM 抑制剂 TFP 对文蛤幼虫附着的影响 | 第100-101页 |
| ·钙调蛋白抑制剂处理后 MmeCaM 和 MmeCaMKIV 表达量的变化 | 第101-103页 |
| ·讨论 | 第103-106页 |
| 第6章 培养细胞中 RNAi 和过表达方法的探索 | 第106-122页 |
| ·引言 | 第106-107页 |
| ·实验材料与方法 | 第107-112页 |
| ·实验材料 | 第107页 |
| ·实验动物 | 第107页 |
| ·实验所用试剂配制 | 第107页 |
| ·实验所使用主要仪器和设备 | 第107页 |
| ·实验方法 | 第107-112页 |
| ·文蛤原代细胞培养方法 | 第107-108页 |
| ·HeLa 和 SF9 的培养方法 | 第108-109页 |
| ·dsRNA 的制备 | 第109页 |
| ·RNA 干扰实验 | 第109-110页 |
| ·实时定量 PCR（realtime PCR） | 第110-111页 |
| ·数据统计 | 第111页 |
| ·Western blot | 第111页 |
| ·转染质粒的构建 | 第111-112页 |
| ·转染实验 | 第112页 |
| ·实验结果 | 第112-118页 |
| ·文蛤血细胞、鳃细胞和肝胰脏细胞原代培养 | 第112-114页 |
| ·MmeLR dsRNA 和 siRNA 在文蛤原代细胞中的干扰效果 | 第114-116页 |
| ·原代细胞基因转移条件的探索 | 第116-117页 |
| ·MmeLR 在 HeLa 细胞系和 SF9 细胞系的转染效果 | 第117-118页 |
| ·讨论 | 第118-122页 |
| 结论 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-145页 |
| 博士期间发表和完成的文章 | 第145-146页 |
| 个人简历 | 第146-147页 |
