中文摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-28页 |
1 几丁质和表皮蛋白是昆虫表皮的主要组成物质 | 第13-14页 |
2 几丁质的性质与种类 | 第14-15页 |
·几丁质的性质 | 第14-15页 |
·几丁质的种类 | 第15页 |
3 昆虫几丁质的生物合成 | 第15-17页 |
·昆虫几丁质合成通路 | 第15-16页 |
·几丁质的合成机制 | 第16-17页 |
4. 昆虫几丁质合成酶 | 第17-19页 |
·几丁质合成酶的结构与种类 | 第17-18页 |
·昆虫几丁质合成酶基因 | 第18-19页 |
5 昆虫几丁质代谢的调控 | 第19-24页 |
·激素的调控 | 第20-21页 |
·几丁质代谢抑制剂的作用 | 第21-23页 |
·利用 RNAi 技术 | 第23页 |
·几丁质合成及其调控的发展方向 | 第23-24页 |
6 昆虫表皮蛋白的特征及分类 | 第24-26页 |
·昆虫表皮蛋白的特征 | 第24-25页 |
·昆虫表皮蛋白的分类 | 第25-26页 |
7 昆虫表皮蛋白基因的表达调控 | 第26-28页 |
第二章 研究目的与内容 | 第28-31页 |
1 目的与意义 | 第28页 |
2 研究内容 | 第28-29页 |
3 研究技术路线 | 第29-31页 |
第三章 主要试剂与常用实验方法 | 第31-42页 |
1 主要试剂与材料 | 第31-33页 |
·菌株与蚕品种 | 第31页 |
·主要生化试剂 | 第31页 |
·主要试剂盒 | 第31-32页 |
·Marker | 第32页 |
·培养基 | 第32页 |
·常用溶液的配制 | 第32-33页 |
·生物信息学资源及分析软件 | 第33页 |
2 主要仪器设备 | 第33-34页 |
3 常用实验方法 | 第34-42页 |
·总 RNA 的提取 | 第34页 |
·基因组 DNA 消化 | 第34页 |
·RNA 反转录 | 第34页 |
·PCR 扩增反应 | 第34-35页 |
·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
·PCR 产物的回收 | 第35页 |
·3′-RACE 反应 | 第35页 |
·5′-RACE 反应 | 第35页 |
·连接反应 | 第35-36页 |
·感受态细胞的制备 | 第36页 |
·重组 DNA 的转化 | 第36-37页 |
·重组质粒的筛选 | 第37页 |
·质粒 DNA 的抽提 | 第37页 |
·限制性内切酶反应 | 第37页 |
·实时定量 PCR(Real time PCR) | 第37-38页 |
·Western-Blot 操作流程 | 第38-40页 |
·家蚕组织石蜡切片的制备 | 第40页 |
·几丁质含量测定及染色 | 第40-41页 |
·几丁质含量测定 | 第40-41页 |
·几丁质的染色 | 第41-42页 |
第四章 家蚕几丁质合成酶 A 基因的表达特征 | 第42-58页 |
1 材料与方法 | 第45-48页 |
·实验动物材料 | 第45页 |
·引物设计 | 第45页 |
·家蚕体壁总 RNA 的提取及反转录合成 cDNA | 第45页 |
·RACE 实验 | 第45页 |
·基因表达谱分析 | 第45-47页 |
·序列分析 | 第47页 |
·蜕皮激素 20-羟基蜕皮酮和保幼激素类似物 Methoprene 处理 | 第47页 |
·Nikkomycins Z 处理实验 | 第47页 |
·几丁质含量测定及几丁质染色 | 第47-48页 |
2 结果与分析 | 第48-56页 |
·ChsA 基因的序列延伸 | 第48-49页 |
·ChsA 基因的表达受 20E 强力诱导 | 第49-54页 |
·ChsA 基因表达影响表皮几丁质含量 | 第54-56页 |
3 讨论 | 第56-58页 |
第五章 家蚕几丁质合成酶 B 基因的表达特征 | 第58-70页 |
1 材料与方法 | 第58-60页 |
·实验动物材料 | 第58页 |
·引物设计 | 第58页 |
·家蚕中肠总 RNA 的提取及反转录合成 cDNA | 第58-59页 |
·RACE 反应 | 第59页 |
·基因表达谱分析 | 第59页 |
·蜕皮激素 20-羟基蜕皮酮和保幼激素类似物 Methoprene 处理 | 第59-60页 |
·ChsB 基因的 RNAi 处理 | 第60页 |
·Nikkomycin Z 处理实验 | 第60页 |
·几丁质含量测定及几丁质染色 | 第60页 |
2 结果与分析 | 第60-68页 |
·家蚕 ChsB 基因的 cDNA 序列延伸 | 第60-61页 |
·家蚕 ChsB 基因的表达受外源激素的调控 | 第61-65页 |
·Nikkomycin Z 抑制 ChsB 基因的表达并影响表皮几丁质的含量和幼虫蜕皮 | 第65-67页 |
·干扰 ChsB 基因对家蚕幼虫生长发育的影响 | 第67-68页 |
3 讨论 | 第68-70页 |
第六章 家蚕假定表皮蛋白类似基因的表达特征 | 第70-78页 |
1 材料与方法 | 第70-72页 |
·实验动物材料 | 第70-71页 |
·引物设计 | 第71页 |
·序列分析 | 第71页 |
·质型多角体病毒抗性检测 | 第71页 |
·多克隆抗体的制备及蛋白免疫印迹分析 | 第71-72页 |
2 结果与分析 | 第72-76页 |
·家蚕 CPV 抗性的性别差异 | 第72-73页 |
·家蚕 Cph-like 基因的序列分析 | 第73-75页 |
·家蚕 CPH-like 蛋白的组织定位 | 第75-76页 |
3. 讨论 | 第76-78页 |
第七章 综合结论 | 第78-80页 |
参考文献 | 第80-93页 |
研究生期间发表的文章及成果 | 第93-94页 |
研究生期间科研资助项目 | 第94-95页 |
附录 | 第95-102页 |
致谢 | 第102-103页 |