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家蚕Chs和Cph-like基因的表达特征及其调控作用

中文摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第一章 文献综述第13-28页
 1 几丁质和表皮蛋白是昆虫表皮的主要组成物质第13-14页
 2 几丁质的性质与种类第14-15页
   ·几丁质的性质第14-15页
   ·几丁质的种类第15页
 3 昆虫几丁质的生物合成第15-17页
   ·昆虫几丁质合成通路第15-16页
   ·几丁质的合成机制第16-17页
 4. 昆虫几丁质合成酶第17-19页
   ·几丁质合成酶的结构与种类第17-18页
   ·昆虫几丁质合成酶基因第18-19页
 5 昆虫几丁质代谢的调控第19-24页
   ·激素的调控第20-21页
   ·几丁质代谢抑制剂的作用第21-23页
   ·利用 RNAi 技术第23页
   ·几丁质合成及其调控的发展方向第23-24页
 6 昆虫表皮蛋白的特征及分类第24-26页
   ·昆虫表皮蛋白的特征第24-25页
   ·昆虫表皮蛋白的分类第25-26页
 7 昆虫表皮蛋白基因的表达调控第26-28页
第二章 研究目的与内容第28-31页
 1 目的与意义第28页
 2 研究内容第28-29页
 3 研究技术路线第29-31页
第三章 主要试剂与常用实验方法第31-42页
 1 主要试剂与材料第31-33页
   ·菌株与蚕品种第31页
   ·主要生化试剂第31页
   ·主要试剂盒第31-32页
   ·Marker第32页
   ·培养基第32页
   ·常用溶液的配制第32-33页
   ·生物信息学资源及分析软件第33页
 2 主要仪器设备第33-34页
 3 常用实验方法第34-42页
   ·总 RNA 的提取第34页
   ·基因组 DNA 消化第34页
   ·RNA 反转录第34页
   ·PCR 扩增反应第34-35页
   ·DNA 琼脂糖凝胶电泳第35页
   ·PCR 产物的回收第35页
   ·3′-RACE 反应第35页
   ·5′-RACE 反应第35页
   ·连接反应第35-36页
   ·感受态细胞的制备第36页
   ·重组 DNA 的转化第36-37页
   ·重组质粒的筛选第37页
   ·质粒 DNA 的抽提第37页
   ·限制性内切酶反应第37页
   ·实时定量 PCR(Real time PCR)第37-38页
   ·Western-Blot 操作流程第38-40页
   ·家蚕组织石蜡切片的制备第40页
   ·几丁质含量测定及染色第40-41页
     ·几丁质含量测定第40-41页
   ·几丁质的染色第41-42页
第四章 家蚕几丁质合成酶 A 基因的表达特征第42-58页
 1 材料与方法第45-48页
   ·实验动物材料第45页
   ·引物设计第45页
   ·家蚕体壁总 RNA 的提取及反转录合成 cDNA第45页
   ·RACE 实验第45页
   ·基因表达谱分析第45-47页
   ·序列分析第47页
   ·蜕皮激素 20-羟基蜕皮酮和保幼激素类似物 Methoprene 处理第47页
   ·Nikkomycins Z 处理实验第47页
   ·几丁质含量测定及几丁质染色第47-48页
 2 结果与分析第48-56页
   ·ChsA 基因的序列延伸第48-49页
   ·ChsA 基因的表达受 20E 强力诱导第49-54页
   ·ChsA 基因表达影响表皮几丁质含量第54-56页
 3 讨论第56-58页
第五章 家蚕几丁质合成酶 B 基因的表达特征第58-70页
 1 材料与方法第58-60页
   ·实验动物材料第58页
   ·引物设计第58页
   ·家蚕中肠总 RNA 的提取及反转录合成 cDNA第58-59页
   ·RACE 反应第59页
   ·基因表达谱分析第59页
   ·蜕皮激素 20-羟基蜕皮酮和保幼激素类似物 Methoprene 处理第59-60页
   ·ChsB 基因的 RNAi 处理第60页
   ·Nikkomycin Z 处理实验第60页
   ·几丁质含量测定及几丁质染色第60页
 2 结果与分析第60-68页
   ·家蚕 ChsB 基因的 cDNA 序列延伸第60-61页
   ·家蚕 ChsB 基因的表达受外源激素的调控第61-65页
   ·Nikkomycin Z 抑制 ChsB 基因的表达并影响表皮几丁质的含量和幼虫蜕皮第65-67页
   ·干扰 ChsB 基因对家蚕幼虫生长发育的影响第67-68页
 3 讨论第68-70页
第六章 家蚕假定表皮蛋白类似基因的表达特征第70-78页
 1 材料与方法第70-72页
   ·实验动物材料第70-71页
   ·引物设计第71页
   ·序列分析第71页
   ·质型多角体病毒抗性检测第71页
   ·多克隆抗体的制备及蛋白免疫印迹分析第71-72页
 2 结果与分析第72-76页
   ·家蚕 CPV 抗性的性别差异第72-73页
   ·家蚕 Cph-like 基因的序列分析第73-75页
   ·家蚕 CPH-like 蛋白的组织定位第75-76页
 3. 讨论第76-78页
第七章 综合结论第78-80页
参考文献第80-93页
研究生期间发表的文章及成果第93-94页
研究生期间科研资助项目第94-95页
附录第95-102页
致谢第102-103页

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