宏基因组α-糖苷酶的筛选、酶学性质表征及其应用
| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-22页 |
| ·宏基因组学的概述 | 第15-17页 |
| ·宏基因组学历史 | 第15页 |
| ·宏基因组文库筛选方法 | 第15-16页 |
| ·宏基因组学的应用 | 第16-17页 |
| ·糖苷水解酶慨述 | 第17-19页 |
| ·糖苷酶的分类 | 第17-18页 |
| ·糖苷酶的催化机理 | 第18页 |
| ·糖苷酶的应用 | 第18-19页 |
| ·熊果苷的研究概述 | 第19-20页 |
| ·熊果苷的来源 | 第19页 |
| ·熊果苷的作用机理 | 第19页 |
| ·熊果苷的生物合成 | 第19-20页 |
| ·本课题研究的背景和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 宏基因组DNA的提取和文库构建 | 第22-26页 |
| ·概述 | 第22-23页 |
| ·宏基因组DNA的提取 | 第22页 |
| ·载体的选择 | 第22页 |
| ·宿主细胞的选择 | 第22-23页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·仪器及设备 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24页 |
| ·土壤样本的采集 | 第24页 |
| ·宏基因组DNA提取 | 第24页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-25页 |
| ·宏基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·宏基因组DNA文库构建 | 第25页 |
| ·小结与讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 α-糖苷酶基因的筛选及表达载体的构建 | 第26-45页 |
| ·概述 | 第26-27页 |
| ·α-糖苷酶基因的筛选 | 第26页 |
| ·侧翼序列克隆方法 | 第26-27页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·菌种、质粒和试剂 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·突验方法 | 第28-37页 |
| ·简并引物的设计 | 第28-29页 |
| ·基于序列筛选α-糖苷酶同源基因 | 第29-31页 |
| ·野生型糖苷酶基因的获取 | 第31-33页 |
| ·嵌合重组获取α-糖苷酶基因全长 | 第33-36页 |
| ·表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-44页 |
| ·简并引物的设计 | 第37-38页 |
| ·简并引物PCR扩增宏基因组DNA | 第38-39页 |
| ·同源基因的克隆与测序分析 | 第39-41页 |
| ·野生型糖苷酶全长基因的获取 | 第41页 |
| ·嵌合重组引物的设计 | 第41-43页 |
| ·嵌合重组基因的菌落PCR鉴定 | 第43页 |
| ·嵌合型糖苷酶基因的序列分析 | 第43-44页 |
| ·嵌合型糖苷酶基因的分析与比对 | 第44页 |
| ·小结与讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 α-糖苷酶异源表达和蛋白纯化 | 第45-51页 |
| ·概述 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·仪器和设备 | 第46页 |
| ·主要溶液配制 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·α-糖苷酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·α-糖苷酶的纯化 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-50页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第49-50页 |
| ·小结与讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 α-糖苷酶的酶学表征 | 第51-62页 |
| ·概述 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第52页 |
| ·α-糖苷酶的酶活测定 | 第52-53页 |
| ·α-糖苷酶的最适反应温度分析 | 第53页 |
| ·α-糖苷酶的最适反应pH值分析 | 第53-54页 |
| ·α-糖苷酶的热稳定性分析 | 第54页 |
| ·α-糖苷酶的pH值耐受性分析 | 第54页 |
| ·同金属离子对α-糖苷酶活性的影响 | 第54页 |
| ·不同有机溶剂对α-糖苷酶活性的影响 | 第54-55页 |
| ·水解底物特异性 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-61页 |
| ·α-糖苷酶的比活 | 第55页 |
| ·最适反应温度 | 第55-56页 |
| ·最适反应pH | 第56-57页 |
| ·α-糖苷酶的热稳定性 | 第57-58页 |
| ·α-糖苷酶的pH耐受性 | 第58页 |
| ·α -糖苷酶的金属离子耐受性 | 第58-59页 |
| ·α -糖苷酶的有机溶剂耐受性 | 第59-60页 |
| ·α-糖苷酶的水解底物特异性 | 第60-61页 |
| ·小结与讨论 | 第61-62页 |
| 第六章 α-糖苷酶催化转糖苷反应 | 第62-74页 |
| ·概述 | 第62-63页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器设备 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-68页 |
| ·α-糖苷酶催化氢醌转糖苷反应 | 第63-64页 |
| ·氢醌转糖苷反应的高效液相色谱分析 | 第64-65页 |
| ·α-糖苷酶的氢醌耐受性分析 | 第65-66页 |
| ·α-糖苷酶催化丁香酚转糖苷反应 | 第66页 |
| ·α-糖苷酶催化葛根素转糖苷反应 | 第66-67页 |
| ·α-糖苷酶催化榄香烯醇转糖苷反应 | 第67页 |
| ·α-糖苷酶催化薄荷醇转糖苷反应 | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-73页 |
| ·氢醌转糖苷反应TLC结果 | 第68-69页 |
| ·熊果苷标准曲线 | 第69页 |
| ·α-糖苷酶催化氢醌转糖苷反应的定量测定 | 第69-70页 |
| ·氢醌转糖苷反应浓度梯度 | 第70-71页 |
| ·丁香酚转糖苷反应TLC | 第71页 |
| ·葛根素转糖苷反应TLC | 第71-72页 |
| ·薄荷醇转糖苷反应TLC | 第72-73页 |
| ·榄香烯醇转糖苷反应TLC | 第73页 |
| ·小结与讨论 | 第73-74页 |
| 第七章 总结与展望 | 第74-76页 |
| ·课题总结 | 第74页 |
| ·创新及意义 | 第74-75页 |
| ·创新 | 第74-75页 |
| ·意义 | 第75页 |
| ·展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 附录 | 第86-89页 |
| 作者简介及硕士期同工作情况 | 第89页 |
