| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩写词表 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 ghrelin的分布 | 第12-13页 |
| 2 影响ghrelin分泌的因素 | 第13-14页 |
| ·禁食和摄食 | 第13-14页 |
| ·激素 | 第14页 |
| 3 ghrelin的生理功能 | 第14-20页 |
| ·调节垂体激素的分泌 | 第15-18页 |
| ·调节摄食 | 第18-19页 |
| ·调节繁殖 | 第19-20页 |
| ·调节糖代谢 | 第20页 |
| 4 ghrelin的分子结构 | 第20-22页 |
| ·基因结构 | 第20-21页 |
| ·多肽结构 | 第21-22页 |
| 5 研究目的和意义 | 第22-25页 |
| ·试验内容和目的 | 第23-24页 |
| ·试验意义 | 第24-25页 |
| 第二章 齐口裂腹鱼ghrelin基因的克隆 | 第25-41页 |
| 1 试验材料 | 第25-27页 |
| ·试验动物和样品采集 | 第25页 |
| ·载体和菌株 | 第25页 |
| ·主要试验试剂 | 第25页 |
| ·溶液的配制 | 第25-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| 2 试验方法 | 第27-33页 |
| ·齐口裂腹鱼肠道的分离和RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·齐口裂腹鱼ghrelin基因的克隆 | 第28-32页 |
| ·ghrelin基因氨基酸序列的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·总RNA抽提与RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·pMD19-T-ghrelin的鉴定 | 第34页 |
| ·生物信息学分析 | 第34-38页 |
| ·同源性的比较与系统进化树的构建 | 第38-39页 |
| 4 分析与讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 齐口裂腹鱼肠道ghrelin基因的原核表达 | 第41-54页 |
| 1 试验材料 | 第41-43页 |
| ·载体和菌株 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·溶液配制 | 第41-43页 |
| 2 试验方法 | 第43-48页 |
| ·ghrelin基因的亚克隆 | 第43-44页 |
| ·表达载体质粒的获得和处理 | 第44-45页 |
| ·质粒的提取 | 第45页 |
| ·目的基因和表达载体的双酶切 | 第45-46页 |
| ·成熟蛋白基因重组表达质粒的构建 | 第46页 |
| ·成熟蛋白基因的原核表达 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-51页 |
| ·ghrelin基因的亚克隆 | 第48页 |
| ·酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第49页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第49-50页 |
| ·诱导时间的优化 | 第50-51页 |
| ·诱导表达产物可溶性的检测 | 第51页 |
| 4 分析与讨论 | 第51-54页 |
| ·表达载体的选择 | 第51-52页 |
| ·表达菌的选择 | 第52页 |
| ·表达条件的优化 | 第52-53页 |
| ·重组成熟蛋白可溶性鉴定 | 第53-54页 |
| 第四章 齐口裂腹鱼ghrelin基因在组织中表达量分析 | 第54-59页 |
| 1 试验材料 | 第54页 |
| ·试验动物 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| 2 试验方法 | 第54-55页 |
| ·总RNA提取 | 第54页 |
| ·引物设计 | 第54-55页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-57页 |
| ·扩增产物的特异性 | 第55-56页 |
| ·ghrelin基因的组织表达量 | 第56-57页 |
| 4 分析与讨论 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59页 |
| 创新点 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65页 |