| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-8页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 技术路线 | 第10-11页 |
| 第一章 Sp1基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定 | 第11-23页 |
| ·材料 | 第12-14页 |
| ·主要仪器 | 第12页 |
| ·质粒、菌株 | 第12页 |
| ·主要实验试剂 | 第12-13页 |
| ·载体的选择 | 第13-14页 |
| ·方法 | 第14-19页 |
| ·RNA干扰片段的设计 | 第14-15页 |
| ·寡核苷酸链的退火 | 第15页 |
| ·pSUPER质粒的双酶切 | 第15-16页 |
| ·琼脂糖电泳分离大分子片段 | 第16页 |
| ·大分子片段的回收 | 第16页 |
| ·寡核苷酸与pSUPER载体的连接 | 第16-17页 |
| ·重组载体转化DH-5α感受态大肠杆菌(TSS法) | 第17页 |
| ·高纯度质粒的制备 | 第17-18页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第18-19页 |
| ·结果 | 第19-22页 |
| ·pSUPER空质粒BglⅡ和Hind Ⅲ双酶切鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第20-22页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第20页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第20-21页 |
| ·测序结果 | 第21-22页 |
| ·小结 | 第22-23页 |
| 第二章 pSUPER-siSp1转染PC-3细胞对SP1及CD59表达的抑制作用 | 第23-37页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·细胞株 | 第25页 |
| ·主要实验试剂 | 第25-27页 |
| ·方法 | 第27-32页 |
| ·载体转染 | 第27-29页 |
| ·RT-PCR检测Sp1、CD59 mRNA表达 | 第29-31页 |
| ·Western blot检测Sp1、CD59蛋白表达 | 第31-32页 |
| ·流式细胞仪检测CD59的表达 | 第32页 |
| ·统计学方法 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-35页 |
| ·PC-3细胞的培养 | 第32-33页 |
| ·重组载体转染效率的测定 | 第33页 |
| ·RT-PCR检测靶基因Sp1、CD59 mRNA相对表达水平的变化 | 第33-34页 |
| ·Western blot检测靶基因Sp1、CD59蛋白水平的变化 | 第34-35页 |
| ·流式细胞仪检测PC-3细胞中CD59基因的表达 | 第35页 |
| ·小结 | 第35-37页 |
| 第三章 Sp1基因沉默对前列腺癌细胞PC-3中CD59生物学行为的作用 | 第37-41页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·MTT | 第38页 |
| ·LDH | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-40页 |
| ·MTT法测定PC-3细胞在新鲜补体作用下的存活性 | 第39页 |
| ·染料释放试验结果 | 第39页 |
| ·统计学方法 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 讨论 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 综述 | 第45-54页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-61页 |
| 1. CD59启动子(-2255/+61) | 第55-56页 |
| 2. CD59启动子分析 | 第56-59页 |
| 3. 重组质粒PCR鉴定序列 | 第59-60页 |
| 4. 重组质粒pSUPER-siSp1测序 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
