| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 绪论 | 第10-24页 |
| 第一节 高产乙醇酿酒酵母的分子选育是燃料乙醇产业化的关键 | 第10-14页 |
| ·国内外燃料乙醇发展概况 | 第10-12页 |
| ·生产燃料乙醇的理想菌株——酿酒酵母 | 第12-14页 |
| 第二节 酿酒酵母育种技术 | 第14-18页 |
| ·酿酒酵母育种研究 | 第14页 |
| ·常规育种 | 第14-15页 |
| ·原生质体融合 | 第15-16页 |
| ·基因工程育种技术 | 第16-18页 |
| ·导入外源基因构建基因工程菌株 | 第16-17页 |
| ·敲除技术在酿酒酵母育种中的应用 | 第17页 |
| ·反义RNA介导的酿酒酵母育种工作 | 第17-18页 |
| 第三节 酿酒酵母乙醇脱氢酶的研究 | 第18-21页 |
| ·乙醇脱氢酶的研究 | 第18-19页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅰ(ADH1) | 第19-20页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅱ(ADH2) | 第20页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅲ(ADH3) | 第20页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅳ(ADH4) | 第20-21页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅴ(sfa1) | 第21页 |
| 第四节 课题的研究目的意义 | 第21-24页 |
| 第一章 材料与方法 | 第24-38页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第24页 |
| ·试剂与溶液的配制 | 第24-26页 |
| ·引物合成 | 第26-27页 |
| ·工具酶及其他试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-38页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·碱裂解法提取PUG6和pYES2.0质粒DNA | 第29页 |
| ·质粒的转化 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的回收 | 第30-31页 |
| ·LiAc/SS载体DNA/PEG高效酵母转化法 | 第31-32页 |
| ·实时荧光定量PCR检测ADH基因表达 | 第32-34页 |
| ·发酵液相关分析方法 | 第34-38页 |
| 第二章 结果与分析 | 第38-60页 |
| ·酿酒酵母总DNA的提取 | 第38页 |
| ·PUG6质粒DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·重叠延伸PCR法获得KanMX基因和酿酒酵母SADH2基因融合片段 | 第39-42页 |
| ·酿酒酵母SADH2基因和KanMX基因的扩增 | 第40-41页 |
| ·重叠延伸PCR扩增SADH2/KanMX片段 | 第41-42页 |
| ·沉默表达载体pSADH2的构建 | 第42-48页 |
| ·质粒pYES2的扩增和鉴定 | 第42-43页 |
| ·pTSK载体的构建 | 第43-45页 |
| ·沉默表达载体pSADH2的构建 | 第45-47页 |
| ·载体pSADH2的酶切验证 | 第47-48页 |
| ·ADH2基因沉默的表达 | 第48-50页 |
| ·质粒pSADH2的线性化 | 第48-49页 |
| ·线性化质粒pSADH2的转化 | 第49页 |
| ·突变菌株的菌落PCR验证 | 第49-50页 |
| ·突变株生长试验测定 | 第50-52页 |
| ·细胞生长试验测定 | 第50-51页 |
| ·突变株遗传稳定性试验检测 | 第51-52页 |
| ·突变株发酵液残糖量分析(DNS法) | 第52-53页 |
| ·突变株发酵乙醇代谢测定 | 第53-54页 |
| ·酿酒酵母SADH2序列生物信息学分析 | 第54-56页 |
| ·荧光RT-PCR检测ADH1和ADH2基因表达 | 第56-60页 |
| ·18S rRNA基因、ADH1和ADH2基因的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| ·溶解曲线分析 | 第57-59页 |
| ·基因表达相对差异分析 | 第59-60页 |
| 第三章 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 结论 | 第62-64页 |
| 附录 主要符号缩略表 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简历 | 第77-78页 |
