| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 技术路线 | 第10-17页 |
| 缩略词简表 | 第17-19页 |
| 前言 | 第19-21页 |
| 第一章 脐静脉内皮细胞衰老过程中S1P受体表达和细胞功能改变的相关性 | 第21-34页 |
| ·材料与方法 | 第21-26页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·结果 | 第26-32页 |
| ·光镜形态学观察和细胞免疫荧光鉴定原代分离和培养的脐静脉内皮细胞 | 第26-27页 |
| ·体外培养的衰老脐静脉内皮细胞的β-半乳糖苷酶染色 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR检测年轻、中年和衰老脐静脉内皮细胞的S1P受体的mRNA表达 | 第28页 |
| ·Western blot检测年轻、中年和衰老脐静脉内皮细胞的S1P受体的蛋白表达 | 第28-29页 |
| ·细胞跨膜迁移实验分析年轻、中年和衰老脐静脉内皮细胞的趋化性 | 第29-30页 |
| ·S1P处理和对照的3组脐静脉内皮细胞的体外管状样结构形成 | 第30-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·结论 | 第33-34页 |
| 第二章 S1P2受体的shRNA腺病毒载体的构建及筛选 | 第34-45页 |
| ·材料与方法 | 第34-39页 |
| ·材料 | 第34-37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·结果 | 第39-43页 |
| ·pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA重组质粒的酶切和PCR鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·转染pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA质粒到人肺动脉内皮细胞后,RT-PCR筛选最佳沉默效果的重组质粒 | 第40-41页 |
| ·重组腺病毒的鉴定、包装及其滴度测定 | 第41-42页 |
| ·采用Western blot技术鉴定重组腺病毒shRNA-S1P2对HPAEC S1P2受体基因沉默的效果 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·结论 | 第44-45页 |
| 第三章 调控S1P2受体表达后对脐静脉内皮细胞的功能影响 | 第45-58页 |
| ·材料与方法 | 第45-50页 |
| ·材料 | 第45-48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·结果 | 第50-56页 |
| ·RT-PCR和Western blot检测转染空白质粒和S1P2重组质粒的年轻内皮细胞的S1P2受体的mRNA和蛋白表达 | 第50-51页 |
| ·过表达S1P2受体对年轻脐静脉内皮细胞的体外管状样结构形成、损伤修复和迁移能力的影响 | 第51-53页 |
| ·沉默S1P2受体后,采用RT-PCR和Western blot检测衰老脐静脉内皮细胞的S1P2受体的mRNA和蛋白表达 | 第53-55页 |
| ·沉默S1P2受体对衰老脐静脉内皮细胞的体外管状样结构形成、损伤修复和趋化反应的影响 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·结论 | 第57-58页 |
| 第四章 S1P2受体对老年大鼠的肺微血管内皮细胞的作用研究 | 第58-73页 |
| ·材料与方法 | 第58-63页 |
| ·材料 | 第58-61页 |
| ·方法 | 第61-63页 |
| ·结果 | 第63-71页 |
| ·采用光镜观察形态学和细胞免疫荧光技术鉴定原代分离的大鼠PMECs | 第63-64页 |
| ·采用RT-PCR和Western blot检测年轻和老年大鼠PMECs的S1P受体的mRNA和蛋白表达 | 第64-66页 |
| ·来自老年大鼠的PMECs对S1P诱导的内皮形态发生、损伤修复和趋化反应 | 第66-67页 |
| ·沉默S1P2基因后,衰老PMECs空白对照组、干扰组和干扰对照组的S1P #2受体的mRNA和蛋白表达 | 第67-69页 |
| ·沉默S1P2受体对衰老PMECs的形态发生、损伤修复和趋化反应的影响 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| 总结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 综述1 | 第81-92页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 综述2 | 第92-99页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第101-102页 |
