| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-27页 |
| ·S-腺苷蛋氨酸概况 | 第11-12页 |
| ·S-腺苷蛋氨酸的研究进展 | 第12-20页 |
| ·SAM的稳定性 | 第12页 |
| ·SAM的代谢途径 | 第12-14页 |
| ·表达SAM的基因 | 第14页 |
| ·SAM基因克隆现状与表达研究 | 第14-16页 |
| ·SAM的生产方法 | 第16-18页 |
| ·SAM的临床应用 | 第18-20页 |
| ·SAM的应用与前景 | 第20页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第20-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第20-21页 |
| ·影响毕赤酵母表达外源蛋白的因素 | 第21-23页 |
| ·毕赤酵母发酵策略与控制 | 第23-24页 |
| ·实验选题依据、研究内容以及技术路线 | 第24-27页 |
| ·选题依据 | 第24-25页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| 第2章 基因的克隆与敲除 | 第27-55页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-37页 |
| ·重组质粒pPIC9K-sam2的构建 | 第29-31页 |
| ·重组质粒pPIC9K-sam2的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒T-cbs的构建 | 第32-33页 |
| ·重组质粒T-cbs的鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒T-C-Z的构建 | 第34-36页 |
| ·重组质粒T-C-Z的鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒T-C-Z的双酶切 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-46页 |
| ·pPIC9K质粒的提取结果 | 第37-38页 |
| ·sam2基因的获取 | 第38页 |
| ·重组质粒pPIC9K-sam2基因的构建 | 第38-39页 |
| ·转化子(pPIC9K-sam2)的筛选与鉴定 | 第39-41页 |
| ·cbs基因的获取 | 第41页 |
| ·重组质粒T-cbs的构建 | 第41-42页 |
| ·zeocin基因的获取 | 第42-43页 |
| ·重组质粒T-C-Z的构建 | 第43-44页 |
| ·转化子(T-C-Z)的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| ·目的基因片段C-Z的获得 | 第45-46页 |
| ·测序结果及分析 | 第46-53页 |
| ·重组质粒pPIC9K-sam2测序结果及分析 | 第46-49页 |
| ·重组质粒T-C-Z测序结果及分析 | 第49-53页 |
| ·结论 | 第53-55页 |
| 第3章 S-腺苷蛋氨酸高产菌株的构建 | 第55-65页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55-56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·仪器设备 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-59页 |
| ·SAM高产菌ZJGSU1的获得 | 第56-58页 |
| ·cbs基因敲除菌ZJGSU2、ZJGSU3的获得 | 第58页 |
| ·SAM合成酶酶活测定 | 第58-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-63页 |
| ·SAM标准曲线的制作 | 第59页 |
| ·SAM高产菌ZJGSU1的获得 | 第59-60页 |
| ·重组酵母ZJGSU1的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·cbs基因敲除菌ZJGSU2、ZJGSU3的筛选与鉴定 | 第60-61页 |
| ·四种菌株的高效液相图谱比较 | 第61-63页 |
| ·四种菌的酶活比较 | 第63页 |
| ·结论 | 第63-65页 |
| 第4章 毕赤酵母摇瓶发酵生产SAM的研究 | 第65-75页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·菌种 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65-66页 |
| ·仪器设备 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·菌种保藏 | 第66页 |
| ·摇瓶发酵 | 第66页 |
| ·SAM含量测定 | 第66页 |
| ·响应面设计 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-74页 |
| ·2-level Factorial实验设计与结果 | 第67-69页 |
| ·Box-Behnken实验设计与结果 | 第69-73页 |
| ·响应面优化前后产SAM曲线对比 | 第73-74页 |
| ·结论 | 第74-75页 |
| 第5章 重组菌ZJGSU3的上罐发酵 | 第75-80页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·培养基 | 第75页 |
| ·菌种 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75页 |
| ·仪器设备 | 第75-76页 |
| ·实验方法 | 第76-77页 |
| ·种子培养 | 第76页 |
| ·发酵培养及诱导方法 | 第76页 |
| ·菌体湿重测定 | 第76-77页 |
| ·甘油含量测定 | 第77页 |
| ·SAM含量测定 | 第77页 |
| ·pH值测定 | 第77页 |
| ·DO值测定 | 第77页 |
| ·结果与分析 | 第77-79页 |
| ·补料工艺的确定 | 第77-78页 |
| ·细胞生长与SAM产量变化曲线 | 第78页 |
| ·5L发酵罐SAM液相图谱 | 第78-79页 |
| ·结论 | 第79-80页 |
| 第6章 结论 | 第80-83页 |
| ·课题总结 | 第80-81页 |
| ·基因的克隆与敲除 | 第80页 |
| ·S-腺苷蛋氨酸高产菌株的构建 | 第80页 |
| ·毕赤酵母摇瓶发酵生产SAM的研究 | 第80-81页 |
| ·重组菌ZJGSU3的上罐发酵 | 第81页 |
| ·创新点 | 第81页 |
| ·进一步研究的内容与建议 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
