| 第一部分 转基因植物安全筛选标记基因的克隆 | 第1-41页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| Ⅰ文献综述 | 第10-16页 |
| ·国内外安全筛选标记的研究进展 | 第10-15页 |
| ·目前使用的筛选标记 | 第10页 |
| ·选择标记基因的应用 | 第10-11页 |
| ·选择标记基因存在的问题 | 第11-12页 |
| ·安全筛选标记的研究和作用机理 | 第12-15页 |
| ·D-丝氨酸脱水酶基因获得及应用 | 第15-16页 |
| ·dsdA 的来源和获得 | 第15页 |
| ·dsdA 的作用机理 | 第15页 |
| ·dsdA 的应用 | 第15-16页 |
| Ⅱ技术路线 | 第16-17页 |
| Ⅲ试验材料与方法 | 第17-31页 |
| ·试验材料 | 第17-19页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·酶与试剂 | 第17页 |
| ·引物设计 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·主要溶液成分 | 第18-19页 |
| ·仪器设备 | 第19页 |
| ·试验方法 | 第19-31页 |
| ·大肠肝菌的培养和处理 | 第19-20页 |
| ·通过PCR 获得dsdA 基因 | 第20页 |
| ·目的片段的回收 | 第20页 |
| ·目的片段（dsdA）与pGM-T Vector 的连接 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第21-22页 |
| ·小量碱裂解法提取质粒 | 第22页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第22-23页 |
| ·dsdA 基因的原核表达载体的构建及其表达 | 第23-25页 |
| ·具有dsdA 基因的植物表达载体构建 | 第25页 |
| ·质粒pBI-dsdA 的大量提取（碱裂解法） | 第25-27页 |
| ·遗传转化 | 第27-29页 |
| ·转基因烟草的检测 | 第29-31页 |
| Ⅳ结果与分析 | 第31-40页 |
| ·D-丝氨酸脱水酶基因（dsdA）的克隆鉴定和序列分析 | 第31-37页 |
| ·d sdA 基因原核表达载体的构建及其表达 | 第34页 |
| ·dsdA 基因原核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·dsdA 基因在原核系统中的表达 | 第36-37页 |
| ·具有dsdA 基因植物表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·dsdA 基因植物表达载体对烟草的转化 | 第38-39页 |
| ·转化方法 | 第38-39页 |
| ·转化后烟草小植株的再生 | 第39页 |
| ·转基因烟草的分子生物学鉴 | 第39页 |
| ·转基因烟草的PCR 检测 | 第39页 |
| ·D-丝氨酸和卡那霉素对比筛选的结果 | 第39-40页 |
| Ⅴ讨论 | 第40-41页 |
| 第二部分 NAMP/Bt 融合蛋白基因克隆及其原核与真核表达载体的构建 | 第41-79页 |
| 摘要 | 第41-42页 |
| Abstract | 第42-43页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| Ⅰ综述 | 第44-52页 |
| ·真菌病害的现状 | 第44页 |
| ·抗菌肽基因的研究及其应用 | 第44-45页 |
| ·抗菌肽的发现 | 第45-47页 |
| ·抗菌肽的作用机理 | 第47-49页 |
| ·苏云金芽孢杆菌（Bt）毒蛋白基因 | 第49-50页 |
| ·Bt 抗虫植物的研究进展 | 第50-51页 |
| ·融合基因的获得 | 第51-52页 |
| Ⅱ技术路线 | 第52-53页 |
| Ⅲ试验材料与方法 | 第53-63页 |
| ·试验材料 | 第53-55页 |
| ·植物材料 | 第53页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·酶与试剂 | 第53页 |
| ·引物设计 | 第53-54页 |
| ·培养基 | 第54页 |
| ·主要溶液成分 | 第54页 |
| ·仪器设备 | 第54-55页 |
| ·试验方法 | 第55-63页 |
| ·新植物抗菌肽(NAMP)的获得 | 第55-56页 |
| ·Bt 定点突变和融合基因的获得 | 第56-59页 |
| ·NAMP-Bt 基因的原核表达载体的构建及其表达 | 第59页 |
| ·具有NAMP-Bt 基因的植物表达载体构建 | 第59页 |
| ·遗传转化 | 第59-63页 |
| Ⅳ结果与分析 | 第63-77页 |
| ·融合基因NAMP-Bt 的获得 | 第63-70页 |
| ·通过PCR 给AMP 加上甘氨酸接头形成NAMP | 第63-70页 |
| ·NAMP-Bt 融合基因原核表达载体的构建和表达 | 第70-72页 |
| ·NAMP-Bt 基因在原核系统中的表达 | 第72页 |
| ·具有NAMP-Bt 基因植物表达载体的构建 | 第72-74页 |
| ·农杆菌介导的含NAMP-Bt 基因植物表达载体对烟草的转化 | 第74-75页 |
| ·工程菌pBI-NAMP-Bt/LBA4404 的检测 | 第74页 |
| ·农杆菌侵染后烟草小植株的再生 | 第74-75页 |
| ·转基因烟草的抗性鉴定和分子生物学鉴定 | 第75-77页 |
| ·卡那霉素的鉴定 | 第75页 |
| ·转基因烟草的PCR 检测 | 第75-76页 |
| ·Southern blot | 第76-77页 |
| ·烟草植株的抗虫性研究 | 第77页 |
| Ⅴ讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简介 | 第86页 |
