白花蛇舌草中Src蛋白激酶抑制成分的分离鉴定
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一篇 论文综述 | 第8-24页 |
| 前言 | 第9页 |
| 1 src基因与Src蛋白结构 | 第9-12页 |
| ·src基因的发现 | 第9-10页 |
| ·src基因的结构特征 | 第10页 |
| ·Src蛋白结构域组成 | 第10-11页 |
| ·Src蛋白空间结构 | 第11-12页 |
| 2 Src蛋白的激酶活性及分子内调节 | 第12-14页 |
| ·Src蛋白激酶活性的发现 | 第12页 |
| ·Src蛋白Tyr527磷酸化对激酶活性的影响 | 第12-13页 |
| ·Src结构域相互作用对激酶活性的影响 | 第13-14页 |
| 3 Src蛋白与肿瘤的关系 | 第14-16页 |
| ·Src蛋白与肿瘤发生 | 第14页 |
| ·Src蛋白与肿瘤侵染 | 第14-15页 |
| ·Src蛋白与肿瘤转移 | 第15-16页 |
| 4 酪氨酸激酶抑制剂的作用途径 | 第16-17页 |
| ·竞争性抑制ATP结合 | 第16页 |
| ·结合蛋白功能区 | 第16-17页 |
| ·抑制蛋白合成 | 第17页 |
| ·Src蛋白酶解 | 第17页 |
| 5 酪氨酸激酶小分子抑制剂 | 第17-21页 |
| ·STI571的发现 | 第18页 |
| ·STI571的作用机理 | 第18-19页 |
| ·STI571对底物的特异性 | 第19页 |
| ·STI57临床研究 | 第19-20页 |
| ·ZD1839和OSI-774 | 第20-21页 |
| 6 酪氨酸激酶抑制剂的作用 | 第21-24页 |
| ·抗肿瘤增殖的作用 | 第21-22页 |
| ·抗肌肉收缩作用 | 第22页 |
| ·抗血小板凝集作用 | 第22-23页 |
| ·对细胞代谢的影响 | 第23页 |
| ·对钙化的影响 | 第23-24页 |
| 第二篇 实验研究 | 第24-57页 |
| 前言 | 第25-27页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第27-30页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·酶 | 第27页 |
| ·分子量标准 | 第27页 |
| ·试剂盒来源 | 第27页 |
| ·缓冲液及其他溶液配方 | 第27-29页 |
| ·琼脂糖电泳缓冲液 | 第27页 |
| ·质粒抽提的溶液 | 第27-28页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液 | 第28页 |
| ·蛋白纯化及复性的溶液 | 第28页 |
| ·酪氨酸激酶活性测定缓冲液 | 第28-29页 |
| ·液体培养基和固体培养基 | 第29页 |
| ·其它主要试剂和商品来源 | 第29页 |
| ·主要仪器及设备 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-37页 |
| ·GST-v-Src菌种鉴定 | 第30-31页 |
| ·质粒抽提 | 第30页 |
| ·酶切检测 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| ·GST-v-Src融合蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·蛋白小量表达及鉴定 | 第31页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·包涵体纯化、复性 | 第32-33页 |
| ·细菌提取物的制备 | 第32页 |
| ·包涵体洗涤及溶解 | 第32页 |
| ·包涵体复性 | 第32-33页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第33页 |
| ·酪氨酸激酶活性测定 | 第33-34页 |
| ·原理 | 第33页 |
| ·磷酸肽标准曲线制备 | 第33-34页 |
| ·酪氨酸激酶活性测定 | 第34页 |
| ·酪氨酸激酶活性抑制剂的筛选方法 | 第34页 |
| ·白花蛇舌草中Src抑制成分的提取 | 第34-36页 |
| ·粗提 | 第34-35页 |
| ·硅胶柱预处理 | 第35页 |
| ·硅胶柱洗脱 | 第35页 |
| ·硅胶薄层层析 | 第35页 |
| ·单一成分的结构鉴定 | 第35-36页 |
| ·肿瘤细胞毒性实验 | 第36-37页 |
| ·贴壁肿瘤细胞的培养传代和冻存复苏 | 第36页 |
| ·MTT比色法测定 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-49页 |
| ·菌种鉴定 | 第37-38页 |
| ·Src融合蛋白的表达及纯化 | 第38-39页 |
| ·白花蛇舌草中有效成分的分离纯化 | 第39-40页 |
| ·硅胶柱分离 | 第39页 |
| ·硅胶板薄层层析 | 第39-40页 |
| ·酪氨酸蛋白活性的检测 | 第40-44页 |
| ·磷酸肽标准曲线 | 第40-41页 |
| ·Src融合蛋白的酪氨酸激酶活性 | 第41页 |
| ·六种治疗肿瘤的中草药的酪氨酸激酶抑制活性 | 第41-42页 |
| ·酪氨酸激酶抑制活性在提取过程中的分配 | 第42-43页 |
| ·两个化合物的酪氨酸激酶抑制活性 | 第43-44页 |
| ·单一有效成分的结构鉴定 | 第44-49页 |
| ·质谱(EIMS) | 第44-45页 |
| ·核磁共振碳谱(~(13)C NMR) | 第45-47页 |
| ·核磁共振氢谱(~1H NMR)及HMOC | 第47-48页 |
| ·紫外光谱(UV) | 第48-49页 |
| ·红外光谱(IR) | 第49页 |
| ·肿瘤细胞毒性作用 | 第49页 |
| 4 实验讨论 | 第49-57页 |
| ·目的蛋白原核表达 | 第49-50页 |
| ·吸附层析的洗脱(展开) | 第50-52页 |
| ·洗脱剂(展开剂) | 第51-52页 |
| ·吸附剂 | 第52页 |
| ·蒽醌类化合物的结构鉴定 | 第52-55页 |
| ·核磁图谱特征 | 第52-53页 |
| ·紫外吸收特性 | 第53页 |
| ·红外光谱特性 | 第53-54页 |
| ·ESI-MS特征 | 第54-55页 |
| ·肿瘤细胞杀伤力与内源Src表达量的关系 | 第55页 |
| ·创新点 | 第55-56页 |
| ·总结和展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 英文缩写词表 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
