| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 0 前言 | 第10-15页 |
| 1 研究进展与评述 | 第15-45页 |
| 1．1 高等植物花发育基因的研究进展 | 第15-25页 |
| 1．1．1 花发育起始的基因调控 | 第16-22页 |
| 1．1．1．1 花序分生组织中特异表达基因 | 第16-18页 |
| 1．1．1．2 花分生组织特异表达基因 | 第18-21页 |
| 1．1．1．2．1 LFY基因的研究进展 | 第18-20页 |
| 1．1．1．2．2 其它花分生组织特征基因的研究 | 第20-21页 |
| 1．1．1．3 花原基特征基因的分析 | 第21-22页 |
| 1．1．2 花器官发育的遗传模型 | 第22-23页 |
| 1．1．3 花器官形态特征控制基因 | 第23-25页 |
| 1．2 植物基因克隆方法策略的研究进展 | 第25-38页 |
| 1．2．1 基因克隆与分离手段的发展进程概述 | 第26页 |
| 1．2．2 基因克隆与分离策略 | 第26-38页 |
| 1．2．2．1 传统基因克隆和分析方法 | 第27-36页 |
| 1．2．2．1．1 序列克隆 | 第27-30页 |
| 1．2．2．1．2 功能克隆 | 第30-35页 |
| 1．2．2．1．3 定位克隆 | 第35-36页 |
| 1．2．2．2 现代基因克隆和分析方法 | 第36-38页 |
| 1．2．2．2．1 cDNA测序——表达序列标记 | 第36-37页 |
| 1．2．2．2．2 对DNA全序列分析 | 第37-38页 |
| 1．3 高等植物基因转化研究进展 | 第38-45页 |
| 1．3．1 植物转基因方法 | 第39-40页 |
| 1．3．2 外源基因转化的受体系统 | 第40-43页 |
| 1．3．2．1 植物基因转化受体系统应具备条件 | 第40-42页 |
| 1．3．2．1．1 高效稳定的再生能力 | 第40-41页 |
| 1．3．2．1．2 较高的遗传稳定性 | 第41页 |
| 1．3．2．1．3 具有稳定的外植体来源 | 第41页 |
| 1．3．2．1．4 对选择性抗生素敏感 | 第41-42页 |
| 1．3．2．1．5 对农杆菌侵染有敏感性 | 第42页 |
| 1．3．2．2 植物基因转化受体系统的类型及其特性 | 第42-43页 |
| 1．3．3 植物转化载体系统 | 第43页 |
| 1．3．4 标记与筛选 | 第43页 |
| 1．3．5 结语及展望 | 第43-45页 |
| 2 柑桔LFY同源基因片段的克隆及分析 | 第45-60页 |
| 2．1 材料与试剂 | 第45-47页 |
| 2．1．1 Uneven PCR法获得csLFY9903 | 第45页 |
| 2．1．2 改良文库筛选法获得csLFY9914 | 第45-47页 |
| 2．2 方法 | 第47-52页 |
| 2．2．1 Uneven PCR法 | 第47-48页 |
| 2．2．1．1 大三岛脐橙基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 2．2．1．2 Uneven PCR扩增 | 第47-48页 |
| 2．2．1．3 目的基因片段克隆 | 第48页 |
| 2．2．1．4 目的基因片段的序列分析 | 第48页 |
| 2．2．2 改良文库筛选法 | 第48-52页 |
| 2．2．2．1 PCR扩增结合铺噬菌体平板法筛选基因文库 | 第48-49页 |
| 2．2．2．2 PCR反应 | 第49页 |
| 2．2．2．3 噬菌斑原位杂交 | 第49-50页 |
| 2．2．2．4 阳性噬菌体DNA的提取与纯化 | 第50页 |
| 2．2．2．5 酶切反应 | 第50-51页 |
| 2．2．2．6 目的基因产物克隆 | 第51页 |
| 2．2．2．7 序列测定 | 第51-52页 |
| 2．3 结果与分析 | 第52-58页 |
| 2．3．1 Uneven PCR法获得csLFY9903 | 第52-53页 |
| 2．3．1．1 柑桔LFY同源基因片段csLFY9903的获得 | 第52页 |
| 2．3．1．2 柑桔LFY同源基因片段csLFY9903的克隆 | 第52-53页 |
| 2．3．1．3 csLFY9903序列比较分析 | 第53页 |
| 2．3．2 改良法筛选文库获得csLFY9914 | 第53-58页 |
| 2．3．2．1 当前‘大三岛’基因组DNA总文库滴度检测 | 第53页 |
| 2．3．2．2 改良文库筛选 | 第53-55页 |
| 2．3．2．3 酶切反应 | 第55-56页 |
| 2．3．2．4 柑桔LFY同源基因片断csLFY9914的克隆 | 第56-57页 |
| 2．3．2．5 csLFY9914序列结果分析 | 第57-58页 |
| 2．4 讨论 | 第58-60页 |
| 3 葡萄高效离体再生系统建立 | 第60-65页 |
| 3．1 实验材料和方法 | 第60-61页 |
| 3．1．1 植物材料 | 第60页 |
| 3．1．2 方法 | 第60-61页 |
| 3．1．2．1 不同激素种类含量对叶片继代增殖及再生新梢的影响 | 第60页 |
| 3．1．2．2 不同激素种类含量对茎段继代增殖及再生新梢的影响 | 第60-61页 |
| 3．1．2．2．1 培养条件 | 第61页 |
| 3．1．2．2．2 统计分析 | 第61页 |
| 3．1．2．2．3 同种激素培养基中不同外植体再生情况比较 | 第61页 |
| 3．2 结果与分析 | 第61-63页 |
| 3．2．1 不同激素种类含量对叶片继代增殖及再生新梢的影响 | 第61页 |
| 3．2．2 不同激素种类含量对茎段继代增殖及再生新梢的影响 | 第61-62页 |
| 3．2．3 同种激素配比下不同外植体再生情况比较 | 第62-63页 |
| 3．3 讨论 | 第63-65页 |
| 4 LFY基因对几种果树的转化研究 | 第65-77页 |
| 4．1 材料与试剂 | 第65-67页 |
| 4．1．1 材料 | 第65页 |
| 4．1．2 试剂 | 第65-66页 |
| 4．1．2．1 基因组DNA提取中相关试剂 | 第65-66页 |
| 4．1．2．2 酶及主要生化试剂 | 第66页 |
| 4．1．2．3 微体嫁接中营养液配制 | 第66页 |
| 4．1．3 压力选择培养基 | 第66页 |
| 4．1．4 工程菌菌株及载体 | 第66页 |
| 4．1．5 寡核苷酸引物 | 第66-67页 |
| 4．2 方法 | 第67-70页 |
| 4．2．1 柑桔高效离体再生体系的建立 | 第67页 |
| 4．2．2 冻融法转化农杆菌 | 第67页 |
| 4．2．3 转基因植株的初步筛选 | 第67页 |
| 4．2．4 转基因植株的分子生物学鉴定 | 第67-69页 |
| 4．2．4．1 两种果树总DNA经济快速提取 | 第67-68页 |
| 4．2．4．2 基因组DNA纯化 | 第68-69页 |
| 4．2．4．3 PCR反应鉴定 | 第69页 |
| 4．2．4．4 Southern blot | 第69页 |
| 4．2．5 转基因柑桔微芽嫁接 | 第69-70页 |
| 4．2．5．1 预处理 | 第69-70页 |
| 4．2．5．2 微体嫁接 | 第70页 |
| 4．2．5．3 培养条件 | 第70页 |
| 4．3 结果 | 第70-73页 |
| 4．3．1 柑桔高效离体再生体系建立 | 第70页 |
| 4．3．2 两种果树作物基因组DNA的提取和纯化 | 第70-71页 |
| 4．3．3 转化植株的筛选获得 | 第71-72页 |
| 4．3．3．1 转基因葡萄植株的初步筛选 | 第71页 |
| 4．3．3．2 转基因柑桔植株的初步筛选 | 第71-72页 |
| 4．3．4 转化植株的分子生物学鉴定 | 第72-73页 |
| 4．3．4．1 PCR反应鉴定 | 第72页 |
| 4．3．4．2 Southern杂交 | 第72-73页 |
| 4．3．5 转LFY柑桔植株的生根问题 | 第73页 |
| 4．4 讨论 | 第73-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 英文摘要 | 第84-87页 |
| 附 录 | 第87页 |
