| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 插图和附表 | 第15-18页 |
| 英文缩略表 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-38页 |
| ·地下害虫蛴螬的危害和防治 | 第19-21页 |
| ·蛴螬的危害 | 第19-20页 |
| ·蛴螬的防治 | 第20-21页 |
| ·苏云金芽胞杆菌cry8 类基因的研究 | 第21-25页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白 | 第21-22页 |
| ·杀虫晶体蛋白作用机理 | 第22-23页 |
| ·Bt cry8 类基因 | 第23-25页 |
| ·抗虫转基因植物的研究及应用 | 第25-31页 |
| ·抗虫转基因植物概述 | 第25-29页 |
| ·影响cry 基因在植物体内表达的因素及应对措施 | 第29-30页 |
| ·转基因植物环境安全性 | 第30-31页 |
| ·发根农杆菌的研究与应用 | 第31-34页 |
| ·发根农杆菌概述 | 第31-32页 |
| ·发根农杆菌的应用 | 第32-34页 |
| ·花生分子育种的研究进展 | 第34-36页 |
| ·花生再生体系的建立 | 第34-35页 |
| ·花生遗传转化体系的建立 | 第35-36页 |
| ·本研究的立题依据与目的与意义 | 第36-37页 |
| ·立题依据 | 第36页 |
| ·目的意义 | 第36-37页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第37-38页 |
| 第二章 cry8Ea1、cry8Ha1 基因植物表达载体的构建 | 第38-53页 |
| ·材料与试剂 | 第38-40页 |
| ·菌株与质粒 | 第38-39页 |
| ·基因检测引物 | 第39页 |
| ·培养基与抗生素 | 第39页 |
| ·酶与生化试剂 | 第39页 |
| ·仪器设备 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-44页 |
| ·基础载体构建流程 | 第40-41页 |
| ·菌种活化 | 第41页 |
| ·碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA | 第41页 |
| ·PCR 反应 | 第41页 |
| ·酶切分析 | 第41页 |
| ·DNA 片段回收 | 第41-42页 |
| ·连接体系 | 第42页 |
| ·E. coli 及农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第43页 |
| ·SDS 法提取植物基因组 | 第43-44页 |
| ·根部特异性启动子的克隆 | 第44页 |
| ·核基质附着序列MAR 的克隆 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-51页 |
| ·根部特异性启动子的克隆 | 第44-45页 |
| ·核基质附着序列MAR 的克隆及含MAR 序列基础载体的改造 | 第45-47页 |
| ·cry8 类基因表达元件的优化 | 第47-48页 |
| ·cry8Ea1、cry8Ha1 基因植物表达载体的构建 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第三章 发根农杆菌介导的花生遗传转化体系的建立 | 第53-66页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·植物材料 | 第53页 |
| ·菌株与质粒 | 第53页 |
| ·抗生素、酶和试剂 | 第53页 |
| ·仪器设备 | 第53-54页 |
| ·培养基 | 第54页 |
| ·研究方法 | 第54-57页 |
| ·发根农杆菌介导的微量注射方式侵染花生 | 第54页 |
| ·发根农杆菌生长曲线的绘制 | 第54页 |
| ·发根农杆菌介导的花生遗传转化体系的优化 | 第54-55页 |
| ·TRIzol 法提取花生根系总RNA 及反转录 | 第55-56页 |
| ·GUS 染色 | 第56页 |
| ·Southern 杂交 | 第56-57页 |
| ·数据分析 | 第57页 |
| ·结果和分析 | 第57-64页 |
| ·发根农杆菌介导的微量注射方式侵染花生体系的建立 | 第57-60页 |
| ·发根农杆菌介导花生遗传转化体系的优化 | 第60-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第四章 转cry8Ea1、cry8Ha1 花生根系的获得 | 第66-72页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·菌株 | 第66页 |
| ·培养基与抗生素 | 第66页 |
| ·检测引物 | 第66-67页 |
| ·供试昆虫 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-68页 |
| ·发根农杆菌介导微量注射方式侵染花生 | 第67页 |
| ·TRIzol 法提取花生根系总RNA 及反转录 | 第67页 |
| ·转基因根系生物活性测定 | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-70页 |
| ·转cry8Ea1 和cry8Ha1 基因根系的RT-PCR 鉴定 | 第68页 |
| ·转cry8Ea1 和cry8Ha1 基因根系的生物活性测定 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第五章 花生组织培养体系的建立 | 第72-82页 |
| ·材料与试剂 | 第72页 |
| ·植物材料 | 第72页 |
| ·激素 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·试验方法 | 第72-75页 |
| ·以去胚子叶为外植体芽诱导培养基的确定 | 第72-73页 |
| ·以去胚子叶为外植体的花生再生体系 | 第73页 |
| ·以幼叶为外植体芽诱导培养基及伸长培养基的确定 | 第73-75页 |
| ·以幼叶为外植体的花生再生体系 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-78页 |
| ·以去胚子叶为外植体组织培养体系的建立 | 第75-77页 |
| ·以幼叶为外植体组织培养体系的建立 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 第六章 根癌农杆菌介导的花生遗传转化 | 第82-95页 |
| ·材料与试剂 | 第82-83页 |
| ·植物材料 | 第82页 |
| ·激素 | 第82页 |
| ·菌株与质粒 | 第82页 |
| ·检测引物 | 第82-83页 |
| ·培养基与抗生素 | 第83页 |
| ·酶与生化试剂 | 第83页 |
| ·研究方法 | 第83-87页 |
| ·以去胚子叶为外植体遗传转化体系的建立 | 第83-84页 |
| ·以幼叶为外植体抗生素筛选压的确定 | 第84页 |
| ·以幼叶为外植体遗传转化体系的建立 | 第84页 |
| ·以幼叶为外植体遗传转化体系的优化 | 第84-85页 |
| ·抗性芽分子鉴定 | 第85页 |
| ·转基因植物的ELISA 检测 | 第85-86页 |
| ·转基因植株中载体骨架断裂位置的确定 | 第86-87页 |
| ·结果与分析 | 第87-93页 |
| ·以去胚子叶为外植体遗传转化体系的建立 | 第87页 |
| ·以幼叶为外植体遗传转化体系的建立 | 第87-89页 |
| ·影响以幼叶为外植体遗传转化效率的因素 | 第89-90页 |
| ·转cry8Ha1、cry8Ea1 基因花生的分子检测 | 第90-91页 |
| ·转cry8Ha1 基因花生的ELISA 检测 | 第91-92页 |
| ·基础载体pDMAR 骨架断裂位置的确定 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93页 |
| ·小结 | 第93-95页 |
| 第七章 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 作者简历 | 第114-115页 |
