| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-25页 |
| 1.MMP-9 基因功能的研究进展 | 第11-18页 |
| ·MMP-9 基因的生物学特点 | 第11-14页 |
| ·MMP-9 基因在恶性肿瘤细胞中表达的研究进展 | 第14-18页 |
| 2.RNA 干扰系统在肿瘤基因治疗中的研究进展 | 第18-23页 |
| ·RNA 干扰基本原理及研究进展 | 第18-20页 |
| ·RNA 干扰在恶性肿瘤实验研究中的应用 | 第20-23页 |
| 3. 本论文的思路、目的和意义 | 第23-25页 |
| 材料与方法 | 第25-37页 |
| 1. 材料 | 第25-27页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·质粒、细胞株 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·常用溶液及培养基配置 | 第26-27页 |
| 2. 方法 | 第27-37页 |
| ·常规细胞生物学方法 | 第27-30页 |
| ·常用细胞克隆方法 | 第30-31页 |
| ·常用蛋白组学检测实验法 | 第31-37页 |
| 结果与分析 | 第37-51页 |
| 第一部分 siRNA 片段筛选和克隆 | 第37-45页 |
| ·shRNA 的构建 | 第37-38页 |
| ·转转染条件的优化 | 第38-41页 |
| ·DNA 量对转染效率的影响 | 第38-39页 |
| ·脂质体量对转染效率的影响 | 第39-40页 |
| ·转染时间对转染效率的影响 | 第40页 |
| ·不同细胞 DNA 质量以及细胞状态对转染效率的影响 | 第40-41页 |
| ·针对MMP-9基因的有效shRNA靶序列筛选 | 第41-45页 |
| ·靶mRNA 表达变化 | 第41页 |
| ·转染MMP-9 特异性shRNA 对胃癌细胞中MMP-9 蛋白表达的影响 | 第41-45页 |
| 第二部分 MMP-9基因沉默的BGC823胃癌细胞克隆构建 | 第45-51页 |
| ·MMP-9 shRNA 质粒分子克隆 | 第45-46页 |
| ·脂质体转染质粒进入胃癌 BGC823 细胞 | 第46页 |
| ·成功转染shRNA 的胃癌细胞单克隆筛选 | 第46-49页 |
| ·蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳分析验证 MMP-9 基因沉默的胃癌细胞克隆 | 第49-51页 |
| 讨论 | 第51-58页 |
| 1. MMP-9 蛋白与胃癌细胞浸润、转移的关系 | 第51-52页 |
| 2. pGenesi 载体介导的稳定 RNAi 系统 | 第52-55页 |
| 3. 筛选单克隆细胞的意义 | 第55-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 综述 | 第74-80页 |
