龙血树钙依赖型蛋白激酶基因的克隆与表达分析
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1. 前言 | 第10-34页 |
| ·龙血树 | 第10-21页 |
| ·龙血树属植物血竭的化学成分研究 | 第10-14页 |
| ·类黄酮化合物 | 第10-13页 |
| ·酚类成分 | 第13页 |
| ·甾体及甾体皂苷类成分 | 第13-14页 |
| ·其它成分 | 第14页 |
| ·龙血树血竭药理作用 | 第14-18页 |
| ·活血化瘀作用 | 第14-15页 |
| ·止血作用 | 第15页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第15页 |
| ·消炎镇痛 | 第15-18页 |
| ·血竭的临床应用 | 第18-19页 |
| ·冠心病 | 第18页 |
| ·糖尿病 | 第18页 |
| ·妇科疾病 | 第18页 |
| ·上消化道出血 | 第18-19页 |
| ·胃炎和消化性溃疡 | 第19页 |
| ·软组织损伤及骨关节损伤 | 第19页 |
| ·痔疮 | 第19页 |
| ·龙血树血竭形成机理的研究 | 第19-21页 |
| ·钙依赖型蛋白激酶的研究现状 | 第21-33页 |
| ·CDPKs 的一般理化性质 | 第22页 |
| ·CDPKs 的结构 | 第22-24页 |
| ·CDPKs 的底物 | 第24-26页 |
| ·CDPKs 在植物中的生理作用 | 第26-30页 |
| ·调节非生物胁迫信号转导途径 | 第26-27页 |
| ·调节激素反应 | 第27页 |
| ·调节病原菌防卫反应 | 第27-28页 |
| ·调节植物的营养代谢 | 第28页 |
| ·在植物生长发育过程中的作用 | 第28-29页 |
| ·参与离子和水分的跨膜运输 | 第29页 |
| ·参与植物细胞骨架的调节 | 第29页 |
| ·调节气孔运动 | 第29-30页 |
| ·CDPKs 的活性调节 | 第30-32页 |
| ·Ca~(2+)浓度的调节 | 第30页 |
| ·磷酸化的调节 | 第30-31页 |
| ·磷脂的调节 | 第31页 |
| ·14-3-3 蛋白的调节 | 第31页 |
| ·CDPKs 的豆蔻酰化和棕榈酰化 | 第31-32页 |
| ·CaM 的拮抗剂的调节 | 第32页 |
| ·调节 CDPK 基因表达的外界因素 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第33-34页 |
| 2. 材料和方法 | 第34-47页 |
| ·材料与试剂 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·质粒及菌种 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34-35页 |
| ·方法与步骤 | 第35-45页 |
| ·引物设计与合成 | 第35页 |
| ·龙血树 Total RNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·RNA 电泳检测 | 第36-37页 |
| ·3`RACE 反应体系和反应程序 | 第37-39页 |
| ·反转录反应 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第38页 |
| ·电泳 | 第38-39页 |
| ·5`RACE 反应体系和反应程序 | 第39-40页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第39页 |
| ·cDNA 的纯化 | 第39页 |
| ·加尾反应体系 | 第39页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第39-40页 |
| ·目的片段的回收与测序 | 第40-44页 |
| ·回收目的片段 | 第40-41页 |
| ·目的片段与T 载体的连接 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态受体菌的制备 | 第41页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第41-42页 |
| ·重组质粒 DNA 的小量提取 | 第42-43页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第43页 |
| ·重组子阳性克隆菌的保存 | 第43-44页 |
| ·核酸序列分析 | 第44-45页 |
| ·cDNA 序列的获得 | 第44页 |
| ·cDNA 序列开放阅读框分析 | 第44页 |
| ·基于 Blastx 软件的核酸同源性分析 | 第44页 |
| ·蛋白质功能预测 | 第44页 |
| ·蛋白质的结构功能域分析 | 第44页 |
| ·基于 Blastx 软件的蛋白质同源性分析 | 第44-45页 |
| ·基因表达特征分析 | 第45-47页 |
| ·RNA 提取 | 第45页 |
| ·cDNA 的合成（方法同2.2.4.） | 第45页 |
| ·引物设计与合成 | 第45页 |
| ·半定量 RT-PCR 模板量的确定 | 第45页 |
| ·RT-PCR 反应体系和条件 | 第45-46页 |
| ·凝胶电泳图像的数字化分析 | 第46-47页 |
| 3. 结果与分析 | 第47-55页 |
| ·龙血树TOTAL RNA 的提取 | 第47页 |
| ·3' RACE 及序列分析 | 第47-48页 |
| ·5' RACE 及序列分析 | 第48-49页 |
| ·全长CDNA 的阅读框架分析 | 第49-51页 |
| ·核酸同源序列分析 | 第51-52页 |
| ·蛋白质的结构功能域分析 | 第52-53页 |
| ·蛋白质同源性分析 | 第53-54页 |
| ·CDPK 基因的表达分析 | 第54-55页 |
| ·龙血树 Total RNA 的提取 | 第54页 |
| ·经诱导和未经诱导的表达差异 | 第54-55页 |
| 4.讨论 | 第55-56页 |
| ·关于RACE 技术应该注意的一些事项 | 第55页 |
| ·下一步研究的方向 | 第55-56页 |
| 5. 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 缩略词 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
