| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 1.文献综述 | 第14-34页 |
| ·KLF家族概述 | 第14-20页 |
| ·KLF因子的发现和进化分类 | 第14-15页 |
| ·KLF因子的结构 | 第15-18页 |
| ·KLF因子的功能 | 第18-19页 |
| ·KLF因子的作用机理 | 第19-20页 |
| ·KLF因子与癌症发生 | 第20-27页 |
| ·Sp蛋白参与癌细胞增殖基因的表达调控 | 第20-23页 |
| ·靶向Sp蛋白途径的癌症治疗策略 | 第23-24页 |
| ·Sp蛋白作用于癌细胞的机理 | 第24-27页 |
| ·Sp蛋白和启动子序列结合中的蛋白因子相互作用 | 第24-25页 |
| ·Sp蛋白和其它核因子的相互作用 | 第25-26页 |
| ·Sp蛋白的修饰 | 第26-27页 |
| ·KLF因子在脉管形成及其病理中的作用 | 第27-31页 |
| ·KLF因子在脉管中的作用 | 第27-29页 |
| ·KLF因子与脉管细胞生长调控 | 第29页 |
| ·KLF因子在脉管细胞中作用的分子机理 | 第29-31页 |
| ·参与脂肪代谢的KLF因子 | 第31-33页 |
| ·KLF4和KLF5 | 第31-32页 |
| ·KLF7 | 第32-33页 |
| ·和KLF因子共同参与脂肪代谢的EGR2 | 第33-34页 |
| 2.研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 3.材料与方法 | 第35-49页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·样品采集 | 第35页 |
| ·菌株和细胞 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·主要生化试剂 | 第36页 |
| ·常用溶液配制 | 第36-37页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第37页 |
| ·分子生物学软件 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-49页 |
| ·DNA/RNA提取和,cDNA制备 | 第37-40页 |
| ·基因组DNA提取 | 第38页 |
| ·总RNA的提取 | 第38页 |
| ·总RNA的纯化(去除DNA) | 第38-39页 |
| ·总RNA含量测定及纯度鉴定 | 第39页 |
| ·逆转录制备cDNA | 第39-40页 |
| ·DNA/cDNA片段的克隆和测序 | 第40-42页 |
| ·PCR反应体系 | 第40页 |
| ·PCR反应条件 | 第40页 |
| ·目的条带的纯化 | 第40-41页 |
| ·目的条带的TA克隆 | 第41页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆 | 第41页 |
| ·重组质粒双酶切进一步验证阳性克隆 | 第41-42页 |
| ·测序 | 第42页 |
| ·目的基因的克隆 | 第42-44页 |
| ·引物设计与PCR反应条件 | 第42-43页 |
| ·各基因部分CDS序列的测序 | 第43页 |
| ·拼接部分cDNA片段获得各基因完整CDS | 第43-44页 |
| ·BLAST检索猪各基因CDS对人的同源性 | 第44页 |
| ·氨基酸水平分析猪各基因和其它物种的同源性 | 第44页 |
| ·染色体定位 | 第44-46页 |
| ·内含子序列的获得 | 第44-45页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·内含子的扩增和测序 | 第45页 |
| ·基因的染色体定位(IMpRH克隆板) | 第45-46页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·PCR反应条件和特异性检测 | 第45-46页 |
| ·PCR信号分型 | 第46页 |
| ·定位信号分析 | 第46页 |
| ·半定量RT-PCR与组织表达谱研究 | 第46-48页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·组织分布引物的温度梯度PCR | 第46页 |
| ·目的基因及内参GAPDH扩增指数期的确定 | 第46-47页 |
| ·半定量RT-PCR | 第47页 |
| ·组织表达谱的定量分析 | 第47-48页 |
| ·药物刺激对3T3-L1前脂肪细胞中目的基因表达的影响 | 第48-49页 |
| ·3T3-L1前脂肪细胞的培养和传代 | 第48页 |
| ·药物刺激及对照设计 | 第48页 |
| ·药物选择及浓度梯度 | 第48页 |
| ·刺激处理及对照设计 | 第48页 |
| ·细胞总RNA的抽提和逆转录 | 第48页 |
| ·半定量RT-PCR及定量分析 | 第48-49页 |
| 4.结果与分析 | 第49-86页 |
| ·Klf4基因的分子特性研究 | 第49-60页 |
| ·猪Klf4部分cDNA的克隆及完整CDS的分析 | 第49-51页 |
| ·猪Klf4部分CDS的克隆及验证 | 第49页 |
| ·氨基酸水平上猪KLF4与其它物种的同源性分析 | 第49-51页 |
| ·猪Klf4基因的染色体定位 | 第51-56页 |
| ·猪Klf4第三内含子的扩增 | 第51-52页 |
| ·猪Klf4染色体定位PCR反应特异性检测 | 第52页 |
| ·猪Klf4染色体定位PCR检测结果 | 第52-53页 |
| ·猪Klf4染色体定位结果 | 第53-54页 |
| ·猪Klf4染色体定位与人的比较 | 第54-56页 |
| ·猪Klf4的组织表达谱 | 第56-58页 |
| ·猪Klf4及内参GAPDH扩增指数期的确定 | 第56-57页 |
| ·猪Klf4组织表达谱的RT-PCR结果及半定量分析 | 第57-58页 |
| ·3T3-L1前脂肪细胞中Klf4的基因表达 | 第58-60页 |
| ·胰岛素对3T3-L1前脂肪细胞中Klf4表达的影响 | 第58-59页 |
| ·克伦特罗对3T3-L1前脂肪细胞中Klf4表达的影响 | 第59-60页 |
| ·Klf5基因的分子特性研究 | 第60-70页 |
| ·猪Klf5完整CDS的克隆及其氨基酸序列分析 | 第60-62页 |
| ·猪Klf5 cDNA 3’和5’部分的克隆 | 第60页 |
| ·氨基酸水平上猪KLF5与其它物种的同源性分析 | 第60-62页 |
| ·猪Klf5基因的染色体定位 | 第62-66页 |
| ·猪Klf5第二内含子的克隆 | 第62-63页 |
| ·猪Klf5染色体定位PCR反应特异性检测 | 第63页 |
| ·猪Klf5染色体定位PCR检测结果 | 第63-64页 |
| ·猪Klf5染色体定位结果 | 第64-65页 |
| ·猪Klf5染色体定位与人的比较 | 第65-66页 |
| ·猪Klf5的组织表达谱 | 第66-68页 |
| ·猪Klf5部分CDS扩增指数期的确定 | 第66-67页 |
| ·猪Klf5组织表达谱的RT-PCR结果及半定量分析 | 第67-68页 |
| ·3T3-L1前脂肪细胞中Klf5的基因表达 | 第68-70页 |
| ·胰岛素对3T3-L1前脂肪细胞中Klf5表达的影响 | 第68-69页 |
| ·克伦特罗对3T3-L1前脂肪细胞中Klf5表达的影响 | 第69-70页 |
| ·Klf7基因的分子特性研究 | 第70-75页 |
| ·猪Klf7完整CDS的克隆及其氨基酸序列分析 | 第70-72页 |
| ·猪Klf7的3’、5’和中间部分cDNA的克隆 | 第70页 |
| ·氨基酸水平上猪KLF7与其它物种的同源性分析 | 第70-72页 |
| ·猪Klf7的组织表达谱 | 第72-73页 |
| ·猪Klf7部分CDS扩增指数期的确定 | 第72页 |
| ·猪Klf7组织表达谱RT-PCR结果及半定量分析 | 第72-73页 |
| ·3T3-L1前脂肪细胞中Klf7的基因表达 | 第73-75页 |
| ·胰岛素对3T3-L1前脂肪细胞中Klf7表达的影响 | 第73-74页 |
| ·克伦特罗对3T3-L1前脂肪细胞中Klf7表达的影响 | 第74-75页 |
| ·Egr2基因的分子特性研究 | 第75-86页 |
| ·猪Egr2完整CDS的克隆及其氨基酸序列分析 | 第75-78页 |
| ·猪Egr2 cDNA 3’、5’和中间部分的克隆 | 第75-76页 |
| ·氨基酸水平上猪EGR2与其它物种的同源性分析 | 第76-78页 |
| ·猪Egr2基因的染色体定位 | 第78-82页 |
| ·猪Egr2第一内含子的克隆 | 第78页 |
| ·猪Egr2染色体定位PCR反应特异性检测 | 第78-79页 |
| ·猪Egr2染色体定位PCR检测结果 | 第79-80页 |
| ·猪Egr2染色体定位结果 | 第80-81页 |
| ·猪Egr2染色体定位与人的比较 | 第81-82页 |
| ·猪Egr2的组织表达谱 | 第82-84页 |
| ·猪Egr2部分CDS扩增指数期的确定 | 第82-83页 |
| ·猪Egr2组织表达谱RT-PCR结果及半定量分析 | 第83-84页 |
| ·3T3-L1前脂肪细胞中Egr2的基因表达 | 第84-86页 |
| ·胰岛素对3T3-L1前脂肪细胞中Egr2表达的影响 | 第84-85页 |
| ·克伦特罗对3T3-L1前脂肪细胞中Egr2表达的影响 | 第85-86页 |
| 5.讨论 | 第86-90页 |
| ·KLF4、KLF5,KLF7和EGR2锌指结构域氨基酸序列分析 | 第86-87页 |
| ·IMpRH方法和KLF家族调控因子染色体分布特征 | 第87-88页 |
| ·Klf4、Klf5、Klf7和Egr2的组织表达特征 | 第88-90页 |
| 6.结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-107页 |
| 论文发表情况和提交的序列 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 附录1.猪Klf5 cDNA序列(Genbank:DQ682407) | 第109-111页 |
| 附录2.猪Klf7 cDNA序列(Genbank:DQ665828) | 第111-112页 |
| 附录3.猪Egr2 cDNA序列(Genbank:DQ665829) | 第112-114页 |
| 附录4.猪Klf4第三内含子序列(Genbank:DQ665830) | 第114-115页 |
| 附录5.猪Klf5第二内含子序列(Genbank:DQ665831) | 第115-116页 |
| 附录6.猪Egr2第一内含子序列(Genbank:DQ825667) | 第116-118页 |
