| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一章 迟缓爱德华菌的生物学特性与致病性(文献综述) | 第13-21页 |
| ·爱德华菌的生物学特性 | 第13-15页 |
| ·分类 | 第13-14页 |
| ·生物学特性 | 第14-15页 |
| ·迟缓爱德华菌的分型 | 第15页 |
| ·迟缓爱德华菌的致病性 | 第15-19页 |
| ·溶血素 | 第15-17页 |
| ·铁载体和刚果红结合试验 | 第17页 |
| ·侵袭性和抗吞噬性 | 第17-18页 |
| ·甘露糖抗性凝集素和其他一些毒力因子 | 第18-19页 |
| ·微生物学检查 | 第19-21页 |
| ·形态特征检查 | 第19页 |
| ·生化特性检查 | 第19页 |
| ·分子生物学及免疫检查方法 | 第19-20页 |
| ·致病性迟缓爱德华菌的检验 | 第20-21页 |
| 第二章 迟缓爱德华菌溶血活化基因eha对大肠埃希氏菌溶血基因clyA的调控 | 第21-29页 |
| ·材料与方法 | 第21-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第21-22页 |
| ·培养基和抗生素 | 第22页 |
| ·酶和试剂及主要仪器型号 | 第22页 |
| ·pED101质粒的构建 | 第22-23页 |
| ·溶血现象的观察 | 第23页 |
| ·RT-PCR | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| ·结果 | 第25-27页 |
| ·溶血现象 | 第25页 |
| ·RT-PCR结果 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE电泳结果 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 迟缓爱德华菌溶血活化基因eha的表达，蛋白纯化及生物学活性 | 第29-47页 |
| ·材料和方法 | 第29-38页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·培养基和抗生素 | 第29-30页 |
| ·酶和试剂及主要仪器型号 | 第30页 |
| ·构建eha重组表达载体pEHA1 | 第30-36页 |
| ·pEHA1在大肠埃希菌 BL21中的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·eha蛋白的纯化 | 第37页 |
| ·eha蛋白的生物学活性检测 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-45页 |
| ·PCR扩增eha片段 | 第38页 |
| ·阳性克隆的筛选及鉴定 | 第38-41页 |
| ·pEHA1克隆子在2%的绵羊血平板上的溶血情况 | 第41页 |
| ·用 IPTG诱导eha的表达 | 第41-42页 |
| ·eha蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·eha蛋白的溶血活性 | 第43页 |
| ·eha蛋白的Vero细胞毒性 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 迟缓爱德华菌溶血活化基因eha缺失株的构建 | 第47-54页 |
| ·材料与方法 | 第47-50页 |
| ·菌株与质粒 | 第47页 |
| ·PCR引物设计 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增e1和e2片段 | 第48页 |
| ·连接e1和e2片段 | 第48页 |
| ·大量扩增e1-e2片段 | 第48页 |
| ·pEH101的构建 | 第48-49页 |
| ·电转入ET-89602 | 第49页 |
| ·第一次同源重组子的鉴定 | 第49页 |
| ·同源重组缺失株的富集 | 第49-50页 |
| ·同源重组缺失株的PCR验证 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-52页 |
| ·e1-e2片段的连接 | 第50-51页 |
| ·质粒pEH101的构建 | 第51页 |
| ·第一次同源重组子的鉴定 | 第51-52页 |
| ·同源重组缺失株的富集及验证 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 主要结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第62页 |
