基于Gap-LCR技术建立EGFR基因突变的检测方法
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| ·药物基因组学与个体化治疗概述 | 第10-12页 |
| ·药物基因组学的研究内容 | 第10页 |
| ·基因多态性与药物效应的多样性 | 第10-11页 |
| ·药物基因组学在合理用药中的应用 | 第11-12页 |
| ·EGFR的结构功能及分子靶向治疗的进展 | 第12-18页 |
| ·非小细胞肺癌概述 | 第12-13页 |
| ·EGFR的结构功能 | 第13-16页 |
| ·EGFR基因突变与吉非替尼治疗非小细胞肺癌进展 | 第16-18页 |
| ·EGFR基因突变检测方法的研究进展 | 第18页 |
| ·单核苷酸多态性的意义及检测方法 | 第18页 |
| ·EGFR基因突变性检测方法 | 第18页 |
| ·立题背景与意义 | 第18-21页 |
| 第二章 EGFR基因突变检测方法的建立 | 第21-31页 |
| ·EGFR检测方法的总体设计 | 第21-22页 |
| ·检测探针的设计方法 | 第22-26页 |
| ·模板扩增PCR引物 | 第22-23页 |
| ·连接反应探针的设计 | 第23-26页 |
| ·连接产物的扩增反应 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26-27页 |
| ·Qubit定量系统检测 | 第27页 |
| ·通用寡核苷酸芯片检测方法 | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 EGFR基因突变的检测方法摸索及优化 | 第31-41页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要溶液 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·探针的溶解及保存 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·样本基因组DNA的提取 | 第32页 |
| ·EGFR基因突变检测方法实验流程 | 第32-34页 |
| ·检测方法的条件优化 | 第34-37页 |
| ·关于聚合连接反应退火温度的优化 | 第34-35页 |
| ·关于聚合连接反应探针量的优化 | 第35页 |
| ·关于两步消化反应的优化 | 第35-36页 |
| ·关于聚合酶的选择以及使用量的优化 | 第36-37页 |
| ·关于P3、p4引物量的优化 | 第37页 |
| ·检测结果的展示 | 第37-40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测EGFR单核苷酸多态性 | 第37-38页 |
| ·Qubit定量系统检测EGFR单核苷酸多态性 | 第38-39页 |
| ·通用寡核苷酸芯片检测方法 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 定点突变克隆各个SNP位点 | 第41-49页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要溶液 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·探针的保存及溶解 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·定点突变的原理 | 第43-44页 |
| ·具体实验流程 | 第44-47页 |
| ·结果 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 检测限的确立及检测非小细胞肺癌病人样本 | 第49-54页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要溶液 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·灵敏度的检测 | 第50页 |
| ·临床非小细胞肺癌样本的检测 | 第50-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 全文小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
