| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-27页 |
| ·禽流感的概述 | 第9-19页 |
| ·禽流感的病原及其特性 | 第9-11页 |
| ·禽流感病毒的分子生物学特性 | 第11-17页 |
| ·禽流感病毒基因组的结构及其编码蛋白的功能 | 第11-16页 |
| ·禽流感病毒病毒的复制 | 第16-17页 |
| ·禽流感病毒的遗传与变异 | 第17页 |
| ·禽流感流行的历史和现状 | 第17-19页 |
| ·禽流感疫苗 | 第19-21页 |
| ·灭活全病毒疫苗 | 第19页 |
| ·亚单位疫苗 | 第19-20页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第20页 |
| ·DNA 疫苗 | 第20-21页 |
| ·标记疫苗 | 第21页 |
| ·A 型流感病毒的反向遗传学技术 | 第21-26页 |
| ·流感病毒反向遗传学技术的发展过程 | 第22-24页 |
| ·流感病毒反向遗传学技术的应用 | 第24-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 试验部分 | 第27-59页 |
| ·试验一 A/Duck/Guangxi/27/03 禽流感病毒的分子遗传与衍化分析 | 第27-48页 |
| ·材料与方法 | 第27-32页 |
| ·病毒 | 第27页 |
| ·SPF 鸡胚 | 第27页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第27页 |
| ·引物 | 第27-28页 |
| ·病毒的增殖和鉴定 | 第28页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第28页 |
| ·病毒RNA 的RT–PCR | 第28-29页 |
| ·目的基因DNA 产物的连接与转化 | 第29-30页 |
| ·阳性重组质粒的筛选 | 第30页 |
| ·酚氯仿高真空绝缘硅脂粗提质粒 | 第30页 |
| ·质粒DNA 的PCR 鉴定 | 第30页 |
| ·质粒DNA 的纯化 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA 的测序 | 第31页 |
| ·病毒各基因的分子遗传演化分析 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-46页 |
| ·病毒RNA 的RT-PCR 产物电泳鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA的 PCR鉴定电泳鉴定结果 | 第33页 |
| ·T 载体克隆质粒DNA 试剂盒纯化电泳鉴定结果 | 第33页 |
| ·病毒全基因组序列测定结果与各基因的分子遗传衍化分析结果 | 第33-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·HA 基因及其编码的氨基酸 | 第46-48页 |
| ·NA 基因及其编码的氨基酸 | 第48页 |
| ·禽流感病毒的内部基因演化分析 | 第48页 |
| ·试验二 A/Duck/Guangxi/27/03 禽流感病毒对BALB/c 小鼠的致病性试验 | 第48-53页 |
| ·材料与方法 | 第48-50页 |
| ·病毒 | 第49页 |
| ·试验动物 | 第49页 |
| ·病毒鸡胚半数感染量(EID50)的测定 | 第49页 |
| ·静脉接种致病指数(IVPI)的测定 | 第49页 |
| ·病毒对小鼠的致病性试验 | 第49页 |
| ·病毒对小鼠的组织嗜性试验 | 第49-50页 |
| ·结果 | 第50-52页 |
| ·病毒鸡胚半数感染量(EID50)的测定结果 | 第50页 |
| ·病毒静脉接种致病指数的测定结果 | 第50页 |
| ·10~6EID_(50) 感染病毒后小鼠体重的变化结果 | 第50页 |
| ·鼻腔感染病毒后小鼠的死亡结果 | 第50-51页 |
| ·病毒对小鼠的组织嗜性试验结果 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·试验三 H5N2 亚型禽流感病毒基因重组疫苗株的构建 | 第53-59页 |
| ·材料与方法 | 第53-56页 |
| ·病毒 | 第53页 |
| ·SPF 鸡胚 | 第53页 |
| ·质粒载体及转染质粒 | 第53页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第53-54页 |
| ·引物 | 第54页 |
| ·病毒RNA 的提取、反转录与PCR | 第54页 |
| ·转染质粒pBD-HA 和pBD-NA 的构建 | 第54-55页 |
| ·病毒拯救 | 第55-56页 |
| ·救获病毒的检测与鉴定 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-58页 |
| ·病毒HA 和NA 基因的RT–PCR 电泳鉴定结果 | 第56-57页 |
| ·pBD-HA 和pBD-NA 质粒的PCR 鉴定结果 | 第57页 |
| ·转染用质粒pBD-HA 和pBD-NA 电泳鉴定结果 | 第57页 |
| ·救获重组病毒 HA 和NA 基因的 PCR 鉴定结果 | 第57-58页 |
| ·救获重组病毒的检测与鉴定结果 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 3 结论 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 附录 | 第71-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
