| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-30页 |
| ·前言 | 第9-10页 |
| ·生物固氮研究进展 | 第10-24页 |
| ·研究历史概况 | 第10-13页 |
| ·根瘤菌的侵染过程 | 第13-15页 |
| ·共生固氮的分子遗传研究进展 | 第15-20页 |
| ·根瘤菌竞争结瘤的分子遗传研究进展 | 第20-22页 |
| ·豆科植物固氮研究的发展趋势 | 第22-24页 |
| ·鉴定与固氮相关基因克隆的主要实验技术 | 第24-30页 |
| ·分离克隆与固氮有关基因的方法 | 第24页 |
| ·鉴定与固氮相关基因克隆的主要实验技术 | 第24-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第30-32页 |
| ·培养基及生长条件 | 第32-34页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·生长条件 | 第33-34页 |
| ·菌种保存 | 第34页 |
| ·抗菌素 | 第34页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第34-36页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第36-39页 |
| ·碱变性法提取质粒DNA | 第36-37页 |
| ·大量制备质粒DNA | 第37-38页 |
| ·试剂盒大量提质粒 | 第38-39页 |
| ·质粒DNA的纯化、定量与沉淀 | 第39-40页 |
| ·酚/氯仿抽提 | 第39-40页 |
| ·电泳 | 第40-41页 |
| ·DNA酶切 | 第41页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第41页 |
| ·DNA酶切片段的分离与回收 | 第41-44页 |
| ·从低熔点胶中回收DNA片段 | 第41-43页 |
| ·试剂盒法回收DNA片段 | 第43-44页 |
| ·DNA的连接 | 第44页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增DNA片段 | 第45页 |
| ·根瘤菌总DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·快速提取 | 第45-46页 |
| ·根瘤菌总DNA的大量提取 | 第46页 |
| ·三亲本接合 | 第46-48页 |
| 第三章 亚克隆测序及生物信息学分析 | 第48-58页 |
| ·ORFa DNA及氨基酸序列分析 | 第49-52页 |
| ·ORFb DNA及氨基酸序列分析 | 第52-53页 |
| ·ORFc DNA及氨基酸序列分析 | 第53-55页 |
| ·ORFd DNA及氨基酸序列分析 | 第55-56页 |
| ·ORFeDNA及氨基酸序列分析 | 第56-58页 |
| 第四章 突变体的构建 | 第58-68页 |
| ·pK18mob(Pknockout vector)单交换重组质粒构建 | 第58-64页 |
| ·各个ORF部分片段的克隆 | 第58-60页 |
| ·部分片段的连接及转化 | 第60页 |
| ·片段连接方向验证 | 第60-64页 |
| ·同源单交换构建突变体 | 第64-68页 |
| ·通过三亲本结合及突变体筛选 | 第64-68页 |
| 第五章 互补菌株的构建 | 第68-74页 |
| ·用来作互补的片段的选择 | 第68-71页 |
| ·从阳性克隆上切下合适的片段 | 第68-69页 |
| ·用PCR的方法扩增合适的小片段 | 第69-71页 |
| ·互补菌株的构建 | 第71-74页 |
| 第六章 突变体及互补菌株的功能验证 | 第74-78页 |
| ·各个突变体及互补株在不同硫源的基本培养基上的生长情况 | 第74-76页 |
| ·用互补法初步验证操纵子结构 | 第76-78页 |
| 第七章 总结与讨论 | 第78-80页 |
| ·研究总结 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79页 |
| ·后续工作 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-89页 |
| 致谢 | 第89页 |