| 第一章 绪论 | 第1-36页 |
| ·研究目的与意义 | 第12-15页 |
| ·非水相生物催化 | 第15-26页 |
| ·非水相生物催化概述 | 第15-17页 |
| ·非水相生物催化的反应介质体系 | 第17-21页 |
| ·有机溶剂对有机介质体系生物催化的影响 | 第21-24页 |
| ·有机溶剂对酶活性的影响 | 第21-22页 |
| ·有机溶剂对酶稳定性的影响 | 第22-23页 |
| ·有机溶剂对酶促反应选择性的影响 | 第23-24页 |
| ·水对有机介质体系生物催化的影响 | 第24-25页 |
| ·酸碱度对有机介质体系生物催化的影响 | 第25-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第26-29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的特点 | 第26-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达的宿主菌 | 第27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达载体 | 第27-28页 |
| ·影响外源蛋白表达的主要因素 | 第28-29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的应用前景 | 第29页 |
| ·研究内容 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-36页 |
| 第二章 海藻酸钙固定化单宁酶性质研究 | 第36-49页 |
| ·引言 | 第36-37页 |
| ·材料与方法 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·酶 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·单宁酶活力测定方法 | 第38-39页 |
| ·海藻酸钙固定化单宁酶的方法 | 第39页 |
| ·海藻酸钙固定化酶与游离单宁酶的性质测定方法 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·单宁酶活力测定的标准曲线 | 第40-41页 |
| ·海藻酸钙固定化方法对单宁酶活力的影响 | 第41-42页 |
| ·海藻酸钙固定化酶与游离单宁酶的动力学性质比较 | 第42-46页 |
| ·最适反应pH值和pH稳定性 | 第42-43页 |
| ·最适反应温度和温度稳定性 | 第43-44页 |
| ·固定化单宁酶重复利用率的考察 | 第44-45页 |
| ·单宁酶催化单宁酸水解反应动力学 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 第三章 有机介质体系中海藻酸钙—壳聚糖固定化单宁酶生物合成棓酸烷基酯的研究 | 第49-63页 |
| ·引言 | 第49-50页 |
| ·材料与方法 | 第50-52页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·酶 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·海藻酸钙—壳聚糖固定化单宁酶的方法 | 第50-51页 |
| ·固定化酶包埋率的测定 | 第51页 |
| ·HPLC法检测棓酸和棓酸丙酯 | 第51-52页 |
| ·有机溶剂与烷醇的脱水 | 第52页 |
| ·棓酸与棓酸丙酯的溶解度测定方法 | 第52页 |
| ·海藻酸钙—壳聚糖固定化酶合成棓酸丙酯的有机介质体系 | 第52页 |
| ·海藻酸钙—壳聚糖固定化酶对烷醇的选择性 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-60页 |
| ·HPLC法测定的标准曲线 | 第52-54页 |
| ·海藻酸钙—壳聚糖固定化单宁酶方法的优化 | 第54-56页 |
| ·棓酸与棓酸丙酯的溶解度 | 第56-57页 |
| ·固定化单宁酶有机介质体系中合成棓酸丙酯 | 第57-59页 |
| ·反应时程曲线 | 第57页 |
| ·水的影响 | 第57-58页 |
| ·有机溶剂的影响 | 第58-59页 |
| ·海藻酸钙—壳聚糖固定化酶对烷醇的选择性 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 第四章 有机介质体系中黑曲霉菌丝生物合成桔酸烷基酯的研究 | 第63-81页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·材料与方法 | 第63-65页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·菌种 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63-64页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-65页 |
| ·黑曲霉摇瓶培养方法 | 第64页 |
| ·黑曲霉菌丝固定化方法 | 第64页 |
| ·黑曲霉菌丝pH的调节 | 第64页 |
| ·黑曲霉菌丝含水量的调节 | 第64-65页 |
| ·黑曲霉菌丝合成棓酸丙酯的有机介质体系 | 第65页 |
| ·黑曲霉L21对烷醇的选择性 | 第65页 |
| ·HPLC测定法 | 第65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-78页 |
| ·有机溶剂的影响 | 第65-67页 |
| ·反应时程曲线 | 第67页 |
| ·黑曲霉菌丝浓度的影响 | 第67-68页 |
| ·外扩散的影响 | 第68页 |
| ·水的影响 | 第68-70页 |
| ·黑曲霉菌丝水含量 | 第68-69页 |
| ·体系水活度 | 第69-70页 |
| ·酸碱度的影响 | 第70-71页 |
| ·温度的影响 | 第71-72页 |
| ·底物浓度的影响 | 第72-74页 |
| ·分批加入底物棓酸的影响 | 第74页 |
| ·黑曲霉菌丝重复利用率的考察 | 第74-75页 |
| ·添加剂的影响 | 第75-76页 |
| ·除水剂 | 第75页 |
| ·辅助剂 | 第75-76页 |
| ·离子强度 | 第76页 |
| ·黑曲霉L21对烷醇的选择性 | 第76-78页 |
| ·小结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 第五章 黑曲霉菌丝生物合成棓酸丙酯的热力学和反应动力学 | 第81-98页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·材料与方法 | 第81页 |
| ·结果与讨论 | 第81-95页 |
| ·温度对单宁酶活力的影响 | 第81-83页 |
| ·温度对单宁酶稳定性的影响 | 第83-85页 |
| ·单宁酶失活动力学 | 第85-86页 |
| ·黑曲霉菌丝生物合成棓酸丙酯的反应动力学 | 第86-95页 |
| ·双底物酶促反应的三种基本反应动力学模型 | 第86-87页 |
| ·反应动力学模型推导 | 第87-92页 |
| ·表观动力学参数的求解 | 第92-94页 |
| ·酯化反应过程的模拟 | 第94-95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-98页 |
| 第六章 单宁酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第98-125页 |
| ·引言 | 第98-100页 |
| ·材料与方法 | 第100-111页 |
| ·菌种与质粒 | 第100页 |
| ·酶 | 第100页 |
| ·试剂盒 | 第100页 |
| ·其他试剂 | 第100-101页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第101-102页 |
| ·培养基 | 第102-103页 |
| ·主要仪器 | 第103页 |
| ·实验方法 | 第103-111页 |
| ·米曲霉培养方法 | 第103-104页 |
| ·米曲霉基因组DNA提取 | 第104页 |
| ·单宁酶基因的克隆 | 第104页 |
| ·PCR产物的回收 | 第104-105页 |
| ·pUCm-Tan9k和pUCm-Tan3.5k质粒的构建与鉴定 | 第105-106页 |
| ·pPIC9k-Tan和pPIC3.5k-Tan表达质粒的构建与鉴定 | 第106页 |
| ·基因重组巴斯德毕赤酵母表达体系的构建 | 第106-110页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达单宁酶的分析 | 第110页 |
| ·巴斯德毕赤酵母有机介质体系中生物合成桔酸丙酯 | 第110页 |
| ·棓酸丙酯测定方法 | 第110-111页 |
| ·结果 | 第111-121页 |
| ·米曲霉单宁酶基因的克隆 | 第111-112页 |
| ·pUCm-Tan9k和pUCm-Tan3.5k质粒的构建 | 第112-115页 |
| ·pPIC9k-Tan和pPIC3.5k-Tan表达质粒的构建与鉴定 | 第115-116页 |
| ·单宁酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第116-121页 |
| ·G418抗性筛选高拷贝基因重组巴斯德毕赤酵母 | 第116页 |
| ·高拷贝基因重组巴斯德毕赤酵母PCR筛选 | 第116-117页 |
| ·巴斯德毕赤酵母转化表型的鉴定 | 第117页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达单宁酶 | 第117-120页 |
| ·巴斯德毕赤酵母有机介质体系中生物合成桔酸丙酯 | 第120-121页 |
| ·讨论 | 第121-123页 |
| ·小结 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-125页 |
| 结论与展望 | 第125-128页 |
| 附录 | 第128-132页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及成果 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134页 |
