| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-25页 |
| 1 双生病毒的分类、基因组特征及寄主范围 | 第10-13页 |
| ·玉米线条病毒属(Mastrevirus) | 第10-11页 |
| ·甜菜曲顶病毒属(Curtovirus) | 第11页 |
| ·番茄伪曲顶病毒属(Topovirus) | 第11-12页 |
| ·菜豆金黄花叶病毒属(Begomovirus) | 第12-13页 |
| 2 双生病毒的复制与转录 | 第13-15页 |
| ·双生病毒的复制 | 第13-14页 |
| ·双生病毒的转录 | 第14-15页 |
| 3 与双生病毒相伴随的新型的卫星分子——DNAβ | 第15-18页 |
| ·DNAβ的发现及其特征 | 第16-17页 |
| ·DNAβ的起源与进化 | 第17页 |
| ·DNAβ的复制 | 第17-18页 |
| 4 DNA复制相关蛋白——Rep | 第18-23页 |
| ·Rep的核酸内切酶和DNA连接酶活性 | 第19页 |
| ·Rep的DNA结合活性 | 第19-20页 |
| ·Rep的ATP酶活性 | 第20页 |
| ·Rep的寡聚化 | 第20页 |
| ·REn与Rep结合，增强病毒的复制 | 第20-21页 |
| ·Rep的自主调控作用 | 第21页 |
| ·Rep的结构保守性 | 第21-23页 |
| 5 双生病毒编码蛋白的核酸结合特性 | 第23-24页 |
| 6 立题依据 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-33页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| ·原核表达载体 | 第25页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·试剂与仪器 | 第25页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-33页 |
| ·PCR技术 | 第25-26页 |
| ·PCR产物纯化 | 第26-27页 |
| ·DNA克隆技术 | 第27-28页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·DNA末端去磷酸化 | 第27-28页 |
| ·感受态细胞制备 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第28-29页 |
| ·PCR鉴定 | 第29页 |
| ·酶切鉴定 | 第29页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达及蛋白纯化 | 第29-30页 |
| ·诱导表达 | 第29页 |
| ·GST融合蛋白的亲和层析纯化 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE与Western印迹分析 | 第30-33页 |
| ·蛋白质含量测定(Bradford法) | 第30页 |
| ·SDS-PAGE | 第30-31页 |
| ·电转移 | 第31页 |
| ·Western印迹分析 | 第31-33页 |
| 第三章 烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化研究 | 第33-40页 |
| 1 材料和方法 | 第33-35页 |
| ·原核表达载体 | 第33-34页 |
| ·菌株和试剂 | 第34页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第34页 |
| ·融合蛋白含量的测定 | 第34页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-38页 |
| ·表达受体菌株对Rep表达的影响 | 第35页 |
| ·温度对重组菌生长和Rep表达的影响 | 第35-36页 |
| ·IPTG诱导培养时间和使用浓度对重组菌生长和Rep表达的影响 | 第36-37页 |
| ·Rep在体外大量表达、纯化及鉴定 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 烟草曲茎病毒复制相关蛋白结合DNAβ特性的初步研究 | 第40-47页 |
| 1 材料和方法 | 第40-43页 |
| ·质粒和试剂 | 第40-41页 |
| ·TbCSV-Y35 DNAβ全长片段的获得 | 第41页 |
| ·探针标记与纯化 | 第41-42页 |
| ·电泳迁移率变动试验胶的配制 | 第42页 |
| ·EMSA结合反应体系 | 第42页 |
| ·EMSA | 第42-43页 |
| ·TbCSV-Y35 DNAβ分片段克隆的构建 | 第43页 |
| ·TbCSV-Y35 DNAβ分片段的获得 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-45页 |
| ·TbCSV-Y35 Rep结合单、双链全长TbCSV-Y35 DNAβ | 第43-44页 |
| ·TbCSV-Y35 DNAβ分片段的获得 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 全文小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录A 本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第53-54页 |
| 附录B 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第54-55页 |
| 附录C 常用生物化学与分子生物学试剂及仪器 | 第55-56页 |
| 附录D 常用缓冲液及培养基配方 | 第56-58页 |
